[發明專利]PCDA囊泡結合CRISPR的快速檢測系統及其方法

在審

• 申請號: 202010054825.7
• 申請日: 2020-01-17
• 公開（公告）號: CN111304294A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 李小剛;劉士忠
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院北京協和醫院;北京電子科技職業學院
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12N9/22;C12N15/113
• 代理公司: 北京慧尚知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11743
• 代理人: 吉海蓮

1.一種PCDA囊泡結合CRISPR的快速檢測系統，其特征在于，所述系統包括檢測目標物質的試劑R1和R2，所述R1包含待檢測的物質或該物質的相關集基團，所述R2包含靶DNA，Cas蛋白-sgRNA復合物和PCDA囊泡。

2.如權利要求1所述的快速檢測系統，其特征在于，所述R1包含目標核酸或者小分子特異性抗體和小分子特異識別基團的緩沖體系。

3.如權利要求2所述的快速檢測系統，其特征在于，所述系統是通過液體體系中游離的小分子與偶聯在小分子特異識別基團上的小分子探針對特異性抗體的結合位點進行競爭原理，并通過囊泡探針由藍變紅的程度受到的抑制情況實現小分子的定性分析。

4.如權利要求2所述的快速檢測系統，其特征在于，所述小分子特異識別基團為小分子修飾DNA/RNA探針，所述小分子修飾的DNA/RNA探針包含Cas蛋白識別所需對應PAM序列的核酸序列。

5.如權利要求2所述的快速檢測系統，其特征在于，所述小分子為分子量小于2000Da的有機分子；所述小分子包括治療藥物、激素、毒品、農獸藥、活體代謝物中的待檢小分子。

6.一種PCDA囊泡結合CRISPR的定量檢測方法，包括如下步驟：

(1)計算不同濃度標準品反應速度繪制標準曲線

通過自動加樣儀器，首先加入標準品，隨后加入R1試劑，最后加入R2試劑，測定不同時間點的熒光值，計算不同濃度標準品的反應速率，繪制標準曲線；

(2)計算樣本體系中待檢物質的濃度

按照步驟(1)的順序依次向自動加樣儀器中加入液體樣本、R1試劑、R2試劑，通過樣本的反應速率值，并根據標準曲線中反應速率與標準品濃度的關系式得到樣本中待檢物質的濃度值。

7.如權利要求6所述的快速檢測方法，其特征在于，所述R1包含目標核酸；所述R2包含靶DNA，bing buffer，Cas蛋白-sgRNA復合物，PCDA囊泡，所述R2為緩沖體系；所述Cas蛋白-sgRNA復合物和PCDA囊泡可以先后加入也可以同時加入。

8.如權利要求6所述的快速檢測方法，其特征在于，所述R1包含生物素；所述R2包含靶DNA，bing buffer，Cas蛋白-sgRNA復合物，PCDA囊泡，所述R2為緩沖體系；所述Cas蛋白-sgRNA復合物和PCDA囊泡先后加入到R1溶液。

9.一種PCDA囊泡結合CRISPR的定性檢測方法，包括如下步驟：

(1)準備目標檢測物并制備R1溶液；

(2)加入R2溶液進行顯色反應，判斷檢測物是否含有目標物質。

10.一種PCDA囊泡結合CRISPR的快速檢測試紙條，其特征在于，所述試紙條包被目標待檢物質的檢測試劑R2，所述R2包含靶DNA，Cas蛋白-sgRNA復合物和PCDA囊泡。