[發明專利]一種腫瘤抗原負載的DC-CIK細胞培養方法

有效

• 申請號: 202010053867.9
• 申請日: 2020-01-17
• 公開（公告）號: CN111117961B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 莫毅;梁紅;吳曼惠
• 申請（專利權）人: 南寧摩米生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0784
• 代理公司: 廣西咕咕狗專利代理事務所(普通合伙) 45137
• 代理人: 朱志寬

本發明屬于細胞培養技術領域，具體地說是一種腫瘤抗原負載的DC?CIK細胞培養方法。一種腫瘤抗原負載的DC?CIK細胞培養方法，包括如下步驟：(1)制備腫瘤抗原；(2)CIK細胞培養；(3)DC細胞培養；(4)DC?CIK細胞培養。本發明的腫瘤抗原負載的DC?CIK細胞培養方法在DC細胞活化過程中添加患者的腫瘤抗原對DC細胞進行活化，可使活化后的DC細胞具有對此種腫瘤細胞的特異性識別，再結合其它細胞因子的誘導作用，可使最后培養出來的DC?CIK細胞兼具特異性和非特異性殺瘤作用，對比傳統方法培養出來非特異性DC?CIK細胞更具有臨床研究價值。

技術領域

本發明屬于細胞培養技術領域，具體地說是一種腫瘤抗原負載的DC-CIK 細胞培養方法。

背景技術

DC-CIK聯合治療是目前腫瘤生物治療最成熟的治療方案之一，DC(即樹突細胞)能夠準確識別腫瘤抗原并將信息傳遞給人體免疫系統，CIK細胞是人體免疫系統中的天然腫瘤殺傷細胞，可通過發揮自身細胞毒性和分泌細胞因子殺傷腫瘤，二者聯合就完成了從辨別腫瘤細胞到消滅腫瘤細胞的全過程。兩者聯合可以顯著抑制腫瘤細胞生長、并逐一消滅腫瘤細胞，最大限度調動愚者自身的免疫系統對抗腫瘤。DC-CIK聯合治療的另一大優勢是源源不斷的免疫細胞的輸入，迅速增強了人體免疫系統，可顯改善患者的生活質量，延長腫瘤患者的生存期。但傳統方法培養出的DC-CIK僅具有非特異性，不具有特異性。

發明內容

本發明提供了一種腫瘤抗原負載的DC-CIK細胞培養方法，以克服傳統方法培養出的DC-CIK僅具有非特異性，不具有特異性的問題。

本發明提供的技術方案為：

一種腫瘤抗原負載的DC-CIK細胞培養方法，包括以下步驟：

(1)制備腫瘤抗原；

(2)CIK細胞培養；

(3)DC細胞培養；

(4)DC-CIK細胞培養。

作為優選，制備腫瘤抗原包括以下步驟：

(1-1)取患者手術切除后的腫瘤組織100g，在無菌條件下用生理鹽水清洗干凈后用手術剪刀將其剪碎，加入ALys505N-0培養基充分研磨；

(1-2)用4200目過濾網過濾收集單細胞懸浮液，1500r/min離心5min 后用ALys505N-0培養基重懸腫瘤細胞至1-2×10⁷個/mL，裝入5mL至凍存管中；

(1-3)充分裂解腫瘤細胞；

(1-4)將腫瘤細胞裂解物加入離心管，3000r/min離心處理10min，收取上清，過濾，所得上清即為腫瘤抗原；將所得腫瘤抗原在-80℃下保存，備用。

作為優選，步驟(1-3)的具體操作為：將凍存管浸入液氮中速凍，10min 后取出放入37°水中速溶5min，如此重復3-5次。

作為優選，CIK細胞培養包括以下步驟：

(2-1)取腫瘤患者外周血50-60mL，利用淋巴細胞分離密度梯度離心法分離出PBMC；

(2-2)將步驟(2-1)所得PBMC細胞用ALys505N-0培養基洗滌一次，所得PBMC細胞濃度需為3-5×10⁷個/mL；

(2-3)用ALys505N-0培養基將步驟(2-2)所得的PBMC的細胞濃度調整為1-2×10⁶個/mL后置于T175培養瓶中，轉移至培養箱中培養；

(2-4)2h后將T175培養瓶從培養箱中拿出，取另外一個T75培養瓶將懸浮細胞收集，加入1000IU/ml IFN-γ培養；