[發明專利]一種檢測牛冠狀病毒BCV的檢測試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 202010049187.X
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111057795A
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 郭志宏;張學勇;朵紅;付永;沈秀英;馬怡雋
• 申請（專利權）人: 青海省畜牧獸醫科學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張晉

1.一種用于檢測牛冠狀病毒BCV的檢測試劑盒，其特征在于盒內包括有擴增引物SEQID NO.3和SEQ ID NO.4。

2.根據權利要求所述1的用于檢測牛冠狀病毒的檢測試劑盒，其特征在于試劑盒內還有引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。

3.根據權利要求所述1或2的用于檢測牛冠狀病毒BCV的檢測試劑盒，其特征在于試劑盒內還有納米金屬粒子的PCR緩沖液、Taq DNA聚合酶。

4.根據權利要求3所述的用于檢測牛冠狀病毒BCV的檢測試劑盒，其特征在于含有納米金屬粒子的PCR緩沖液為NPK02。

5.一種非疾病診斷目的使用權利要求1至3所述的任一試劑盒的方法，其特征在于：提取待檢樣本中病毒的RNA，并將RNA反轉錄為cDNA得到擴增模板，將擴增模板用擴增引物SEQID NO.3和SEQ ID NO.4進行PCR擴增，PCR產物用瓊脂糖電泳檢測，根據電泳圖中是否出現特定條帶確定待檢樣本是否帶有牛冠狀病毒。

6.根據權利要求5所述的非疾病診斷目的使用檢測牛冠狀病毒BCV的檢測試劑盒方法，其特征是PCR時的反應體系為：

2×nano PCRBuffer 12.5Μl，

引物P3/P4(10μM)0.8μL，

pET-28a-N(+)1.0μL，

Taq DNA聚合酶(5U/μL)0.5μL，

ddH₂O補至總體系25.0μL。

反應條件為：

95℃、5min；

35個循環：95℃、30s，51℃、30s，72℃、30s；

72℃、10min。