[發明專利]一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 202010045283.7
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111187844B
• 公開（公告）日: 2023-09-19
• 發明（設計）人: 楊曉軍;李洋;王滿滿;鄭斯竹;吳晶;伏建國;安榆林
• 申請（專利權）人: 南京海關動植物與食品檢測中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6869
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 王玉

本發明公開了一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒，包括引物DRI/DYI試劑和基因條形碼序列盤；引物DRI序列：5’?AGGAGCATCTGTTGACTT?3，引物DYI序列：5’?ATAAACTTCTGGGTGTCC?3’。本發明還公開了利用該檢測試劑盒檢測毛小蠹屬昆蟲的方法，以待測樣品DNA為模板，進行PCR擴增反應，PCR產物測序獲得基因序列；將待測毛小蠹測序得到的序列與基因條形碼序列盤中標準基因條碼序列進行比對，判斷是否為目標種類。本發明的毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒是一種高效、準確、便捷的毛小蠹屬昆蟲的分子檢測技術，可在分子水平將毛小蠹屬9種昆蟲種類區分，能滿足使用需求。

技術領域

本發明涉及毛小蠹屬昆蟲檢測技術領域，具體涉及一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

毛小蠹屬昆蟲為重要的林木害蟲，大多為害干枯死亡的樹木，寄主包括云杉、冷杉、馬尾松、油松等。該屬所有蟲態均能隨寄主木材和木質包裝材料的遠距離運輸而傳播擴散，從而造成危害。目前毛小蠹屬的種類鑒定研究仍主要集中于形態識別，傳統的昆蟲形態鑒定方法存在一定的局限性，必須以完整成蟲作為形態學研究對象，近緣種、幼蟲、蛹的形態結構與殘缺的蟲體均難于鑒定。隨著分子生物學研究的起步，越來越多的技術可以被用于毛小蠹屬昆蟲的種類鑒定。隨著科技水平的提高，近年來不少人開始利用分子生物學手段對昆蟲進行分子鑒定。分子生物學手段一般所需樣品量較少，具有快速準確等優點，可以為害蟲的鑒定提供可靠的參考依據。

昆蟲的線粒體DNA(mtDNA)是一種閉合的雙鏈環狀遺傳物質，穩定性高，大小一般為?15.4～16.3kb，以高拷貝數目存在于線粒體內，進化速率較核更快，且為母系遺傳，在遺傳過程中不發生基因重組倒位易位等突變，這些特點使在昆蟲近緣種的分類和種間鑒別等研究中有著十分重要的意義。此外，在昆蟲新種甚至復合種的鑒定中也是非常重要的標記對象。王銀竹等(2010)對來自不同國家的10種長小蠹科(Platypodidae)昆蟲的mtDNA?COI基因序列進行測定分析，發現這10種長小蠹在基因序列上存在明顯差異，為長小蠹科昆蟲的準確鑒定提供了分子依據。Feng等(2012)分析了31種重要蠅科(Muscidae)昆蟲的mtDNACOI?基因序列，研究蠅科昆蟲的系統進化和分類鑒定，表明該段序列可作為蠅科昆蟲分子鑒定的依據。潘程瑩等(2006)測定了7種蝗蟲的mtDNA?COI基因序列，探討了COI基因作為DNA?條形碼鑒定蝗蟲物種的可行性。常虹等(2012)的研究表明應用基于mtDNA?COI基因片段的?DNA條形碼進行齒小蠹屬分類鑒定具有可行性。

DNA條形碼技術是利用一段或幾段標準的、易擴增的、種間差異顯著大于種內差異的?DNA片段來鑒別物種的新技術，該概念最早由加拿大學者Hebert提出。與傳統的分類鑒定技術相比，DNA條形碼技術具有許多無可比擬的優點：(1)操作簡單，對物種分類鑒定知識缺乏的人也可以通過標準技術流程對物種進行鑒定；(2)不受個體發育階段和形態特征的限制，只要個體存在完整的目標DNA片段即可滿足鑒定需求；(3)該技術可以作為傳統分類學的輔助手段，幫助傳統分類學家修正以往的分類結論，解決形態分類無法解決的難題。正是由于DNA條形碼技術具有以上及其它很多優點，越來越多的研發人員加入了DNA條形碼技術研究行列，使該領域成為生物學研究的熱點之一(Hebert，2006)。但是目前關于毛小蠹屬的基因條碼快速檢測技術研究，國內外暫無相關的系統報道。因此，建立準確可靠的毛小蠹屬昆蟲條形碼檢測技術，不僅對我國檢疫部門具有重要的意義，更是對我國基因資源的補充，特別是毛小蠹屬害蟲資源的補充，為我國在爭奪有限的資源方面能做出一定的貢獻，同時也為毛小蠹屬的分類鑒定提供新的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的缺陷，提供一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒及檢測方法，實現快速高效的檢測毛小蠹屬昆蟲。

為解決上述技術問題，本發明提供一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒，至少包括基因條形碼序列盤和引物DRI/DYI試劑；引物DRI/DYI序列如下：