[發明專利]一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 202010045283.7
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111187844B
• 公開（公告）日: 2023-09-19
• 發明（設計）人: 楊曉軍;李洋;王滿滿;鄭斯竹;吳晶;伏建國;安榆林
• 申請（專利權）人: 南京海關動植物與食品檢測中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6869
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 王玉

1.一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒，其特征是，至少包括基因條形碼序列盤和引物DRI/DYI試劑；引物DRI/DYI序列如下：

引物DRI序列：5’-AGGAGCATCTGTTGACTT-3，

引物DYI序列：5’-ATAAACTTCTGGGTGTCC-3’；所述基因條形碼序列盤存有45條標準條碼序列，詳細序列為SEQ?ID?NO.1到SEQ?ID?NO.45所示。

2.根據權利要求1所述的毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒，其特征是，還包括下列試劑：Taq?buffer，MgCl₂，dNTP?mix，Taq?DNA聚合酶，ddH₂O，DNA標準樣。

3.根據權利要求1所述的毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒，其特征是，可以快速檢測9種毛小蠹，所述的9種毛小蠹具體為：冷杉毛小蠹、云杉毛小蠹、美樺毛小蠹、美云毛小蠹、腎點毛小蠹、披毛小蠹、混點毛小蠹、額毛小蠹、松毛小蠹。

4.一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒檢測毛小蠹屬昆蟲的方法，其特征是，包括以下步驟：

提取待檢測樣品DNA；

以待測樣品DNA為模板，使用權利要求1所述的引物進行PCR擴增反應，將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠置于成像系統中拍照；照片顯示毛小蠹與標準DNA樣品在316bp位置有清晰的擴增條帶，即為目標條帶；

PCR產物測序獲得基因序列；

將待測毛小蠹測序得到的序列與權利要求1所述的基因條形碼序列盤中標準基因條碼序列進行比對，判斷是否為目標種類；

將待測毛小蠹測序得到的序列與基因條形碼序列盤中標準基因條碼序列進行比對的具體方法為：

A：與標準基因條碼序列相似度100％，則認定其為該種類；

B：沒有與任何標準條碼序列相似度達100％，則將待測毛小蠹基因序列按“無脊椎動物密碼子”翻譯為氨基酸，與標準基因條碼序列所對應的氨基酸序列使用“P-distance模型”計算遺傳距離，與未知種類毛小蠹基因序列遺傳距離小于2％的標準基因條碼種類，即為目標種類；如果遺傳距離都大于2％，判定未知毛小蠹種類不在此9種毛小蠹范圍內。

5.根據權利要求4所述的一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒檢測毛小蠹屬昆蟲的方法，其特征是，采用GenMagBio動物細胞組織/細胞基因組DNA磁珠提取試劑盒提取待檢測樣品。

6.根據權利要求4所述的一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒檢測毛小蠹屬昆蟲的方法，其特征是，所述PCR擴增反應體系為：總體積為50μL，其中含5μL?10×Taq?bufferwith?KCl、2mmol/L?MgCl₂、200μmol/LdNTP?mix、2U?Taq?DNA聚合酶、3μL?DNA模板、1μmol/L引物。

7.根據權利要求4所述的一種毛小蠹屬昆蟲基因條形碼檢測試劑盒檢測毛小蠹屬昆蟲的方法，其特征是，所述PCR擴增反應程序為：循環前95℃預變性2min；95℃變性30s、52℃退火溫度30s，72℃延伸45s，進行35個循環；循環結束后72℃延伸10min，-20℃保存。