[發(fā)明專利]三重定量檢測鐮刀菌毒素的熒光微球免疫層析試紙條、其制備方法和應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010045027.8
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN111089956A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 嚴亞賢;侯思露;孫建和
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 周一新;胡永宏

本發(fā)明公開了三重定量檢測鐮刀菌毒素的熒光微球免疫層析試紙條、其制備方法和應用，包括：將分別包被有ZEN?BSA、DON?BSA、FB1?BSA的檢測線和羊抗鼠IgG抗體的控制線的硝酸纖維素膜、噴涂有FB1、DON、ZEN的單克隆抗體?熒光微球標記物混合物的結(jié)合墊、樣品墊和吸水墊按順序依次粘貼于底板上，組裝后切小條得到。本發(fā)明將三種鐮刀菌毒素的檢測整合在一個試紙條上，形成的多通道檢測效率高，且所得試紙條特異性好、靈敏度高，操作簡單，非專業(yè)人員也可使用，滿足糧食儲存銷售機構(gòu)、出入境檢疫、海關(guān)、生產(chǎn)企業(yè)、監(jiān)督部門等快速準確地判斷FB1、DON和ZEN毒素具體含量的要求，便于基層推廣和運用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，是一種利用量子點組合而成的熒光微球作為信號放大材料且同時檢測伏馬毒素B1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的免疫層析試紙條、其制備方法和應用。

背景技術(shù)

真菌毒素是真菌生長過程中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，對人和動物都具有一定的危害。常見的真菌毒素主要來源于曲霉菌屬(Aspergillus)、青霉菌屬(Penicillium)和鐮刀菌屬(Fusarium)，迄今為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)400多種真菌毒素。而鐮刀菌生長過程中會產(chǎn)生多種毒素，其中伏馬菌素B1(Fumonisins B1,FB1)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)均屬于常見的鐮刀菌屬毒素，廣泛分布于自然界中，主要污染玉米、小麥、大麥和燕麥等多種農(nóng)作物及其制品。不同的鐮刀菌具有不同的理化性質(zhì)和毒理作用，但他們均嚴重危害著人和動物的健康，可引起不同組織器官、免疫、神經(jīng)、生殖系統(tǒng)的損傷。

鐮刀菌毒素對人和動物健康和經(jīng)濟的發(fā)展的影響是巨大的，因此國際上各個組織和國家均制定了相關(guān)的限量標準，并且研發(fā)出許多的檢測方法以監(jiān)控其污染程度，以保證食品的安全。目前，有關(guān)鐮刀菌素的檢測方法主要有兩種：色譜法和免疫學方法，色譜法主要包括高效液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等，優(yōu)點是精確、靈敏度高，但需依靠昂貴的儀器和專業(yè)的操作人員，且僅限于實驗室檢測；免疫學方法則相對較簡單，它是基于抗原抗體反應的檢測方法，對儀器設(shè)備的要求相對較低，但也相對依賴專業(yè)人員的操作。免疫學方法種類繁多，但成功用于市場的并不多，其中酶聯(lián)免疫吸附試劑盒是其中一種，但操作較復雜，耗時較長，依賴專業(yè)操作人員和配套的儀器，不適合現(xiàn)場檢測。

基于膠體金免疫層析法的試紙條則能克服上述方法的不足，膠體金免疫層析法同樣是利用抗原抗體反應的原理，單克隆抗體-膠體金標記物與固定在硝酸纖維素膜上的抗原或抗體形成復合物被截留聚集而顯色，不需要特定的酶和底物顯色，也不需要抗原抗體之間的較長時間的物理吸附，簡單又快速，僅需根據(jù)顯色與否判定陰陽性結(jié)果，安全有效，簡單方便，已成功用于臨床醫(yī)學和食品安全領(lǐng)域，如早早孕檢測試紙和瘦肉精檢測試紙。然而，目前商品化的膠體金免疫層析試紙條絕大多數(shù)為單一檢測，且靈敏度有限。熒光微球是是由高質(zhì)量的CdSe/ZnS量子點和生物相容性高分子通過自組裝的方式制備得到，通過納米球包覆將量子點的熒光信號放大，可以明顯提高免疫檢測靈敏度，也解決量子點不穩(wěn)定的問題，基于熒光微球的同時檢測三種鐮刀菌毒素(FB1、DON和ZEN)的免疫層析試紙條尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種利用量子點組合而成的熒光微球作為信號放大材料且同時檢測伏馬毒素B1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的免疫層析試紙條，該試紙條對FB1、DON和ZEN的特異性好，靈敏度高，檢測速度快，且簡單易操作，非專業(yè)人員也可使用，其技術(shù)方案是：

三重定量檢測鐮刀菌毒素的熒光微球免疫層析試紙條，由下到上依次包括底板、硝酸纖維素膜、結(jié)合墊、樣品墊和吸水墊；其中：

所述三重定量檢測的鐮刀菌毒素為FB1、DON和ZEN；

所述硝酸纖維素膜按照水平方向依次噴涂包被有羊抗鼠IgG抗體作為控制線(C線)、和ZEN-BSA、DON-BSA和FB1-BSA的檢測線(依次為T1～T3線)；