[發明專利]一種高效快速檢測及定量血清或血漿核酸的試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202010044493.4
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111139313B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 溫維佳;高一博;楊成勇
• 申請（專利權）人: 深圳市尚維高科有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 北京華創智道知識產權代理事務所(普通合伙) 11888
• 代理人: 彭隨麗

本發明涉及一種高效快速檢測及定量血清或血漿核酸的試劑盒及其檢測方法。所述試劑盒包括核酸釋放劑、反應液、對照品、標準品、內標，所述的核酸釋放劑由KOH、十二烷基硫酸鋰或十二烷基硫酸鈉、吐溫20組成，溶劑為無核酶的去離子水。本發明提供了一種高效快速檢測及定量血清或血漿中肝炎病毒核酸的方法，其中的核酸釋放劑能夠高效快速釋放血清(或血漿)中各種形態的核酸，然后直接加入反應液即可進行檢測，配方簡單，對核酸擴增無污染影響，檢測結果準確，既能檢測DNA,也能檢測RNA，對不同復雜程度的核酸更具普適性，輕松地解決了大多數復雜模板擴增困難的問題。

技術領域

本發明涉及生物醫學臨床分子診斷和動物防疫分子診斷，提供一種試劑盒及其方法，高效快速檢測及定量人及動物血清(或血漿)中特定的病原微生物及其他特定的游離核酸分子。

技術背景

很多病原微生物的篩查和診斷，是通過檢測血清或者血漿中的病原微生物，比如人類血篩的DNA病毒主要為HAV、HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋體菌、EB病毒、CMV、新生兒腸道DNA病毒等。在動物防疫方面，比如ASFV、PDCoV、高致病性豬藍耳病病毒、豬偽狂犬病毒等，都可以對血清或血漿進行檢測及定量。傳統的免疫學和微生物等方法檢測各種病原微生物，其缺點是靈敏度低、窗口期長。目前核酸分子檢測技術得到了很好的發展，其靈敏度高、特異性好、能定量，而且極大的縮短了檢測的窗口期。當前常用的熒光定量PCR技術，是先將樣品中的核酸提取出來，再對提取出來的核酸進行檢測及診斷。但是核酸提取過程復雜、耗時長，且容易產生污染，而且需要消耗大量試劑及其它耗材。

通常，熒光定量PCR檢測DNA、RNA所用的模板是純化好的核酸，核酸從復雜樣品中純化出來需要經過繁瑣的操作，從而將核酸從雜質中釋放、純化出來，避免雜質隨核酸進入PCR體系進而抑制PCR。不同的樣品類型，雜質類型的復雜程度及含量都不同。常見的雜質有膽酸鹽、復雜多糖、膠原質、血紅素、血色素、各種離子、蛋白質類、脂類等，這些雜質對PCR產生嚴重的抑制，需要經過繁瑣的操作步驟將雜質去除。核酸的提取過程，一般需要經過：裂解樣品釋放核酸→核酸沉淀出來或釋放的核酸被固體介質吸附→吸棄雜質→洗滌液洗滌，吸棄洗滌液(多次操作)→洗脫液從介質上洗脫核酸，最終才能得到純度比較高的核酸，該過程涉及液體的多次轉移，操作復雜，耗時長，易產生污染，效率低下，且需要大量試劑及其它耗材。其中核酸釋放劑和反應液是影響核酸定量和快速檢測結果的主要因素。

核酸的純化原理無外乎是裂解試劑裂解樣品釋放出核酸，然后加入有機溶劑使核酸沉淀出來或者吸附于固體介質，再吸棄上清液(廢液)，再多次用洗滌液洗滌核酸，最后用溶解液溶解沉淀的核酸或將核酸從固體介質上洗脫下來。目前市場上，核酸純化試劑盒從純化方式上大體可以分為三類：離心沉淀抽提、純化柱法、磁珠法，純化柱法、磁珠法的核酸提取試劑盒使用的比較廣泛，因為柱提、磁珠法可以獲得純度比較高的核酸。但不管是純化柱法還是磁珠法，其過程涉及液體的多次轉移，操作復雜，耗時長，易產生污染，效率低下，且需要大量試劑及其它耗材。

熒光定量PCR技術中最關鍵的就是要預防核酸的污染，避免出現假陽性結果，特別是要防止擴增產物對PCR的污染。由于PCR有著高效的擴增效率，其擴增產物的濃度是初始濃度的幾百萬倍，一個氣溶膠顆粒可含48000拷貝。由于UV照射對500bp以下的DNA片段的去污效果不好，而分子診斷擴增的片段在200bp左右，UV照射不能有效清除分子診斷擴增帶來的污染問題。

目前市場上，有很多核酸檢測試劑盒，而且很多已經應用于醫學臨床診斷、防疫、食品安全領域。而目前市場上的核酸檢測試劑盒絕大部分是需要經過復雜的核酸提取純化過程，然后再進行PCR檢測。針對目前核酸檢測試劑盒的諸多缺陷，急需改進核酸檢測技術，研發一款操作簡單、污染可能性低、耗時短、效率高、靈敏度高、試劑及其耗材消耗量少的檢測試劑盒。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高效快速檢測及定量血清或血漿核酸的試劑盒及其檢測方法。

本發明的高效快速檢測及定量血清或血漿核酸的試劑盒，包括核酸釋放劑、反應液、對照品、標準品、內標，