[發明專利]Echo30單克隆抗體的制備及其用途

有效

• 申請號: 202010043727.3
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111153989B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 張黎;王康;鄭濱洋;朱玲;蘇璇;張倩;陶焱煬;崔侖標;潘紅星;葛以躍;吳濤;王祥喜;朱鳳才
• 申請（專利權）人: 江蘇省疾病預防控制中心（江蘇省公共衛生研究院）
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N15/85;G01N33/577;G01N33/569;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 孟祥斌;朱萍

本發明涉及Echo30單克隆抗體的制備及其用途。本發明的抗體的CDR序列如SEQ ID NO：1?3和SEQ ID NO：5?7所示，抗體重鏈可變區的序列如SEQ ID NO：4所示，抗體輕鏈可變區的序列如SEQ ID NO：8所示。本發明的抗體可使用本領域常規方法制備，利用體外實驗證明純化的抗體具有Echo30結合特異性和中和Echo30的中和活性，故本發明的抗體可用于臨床診斷或治療。

技術領域

本申請屬于生物醫學領域，具體涉及Echo30單克隆抗體的制備及其用途。

背景技術

埃可病毒(Echovirus)屬于腸道病毒(Enteroviruses，EVs)。腸道病毒由微小核糖核酸病毒科中的67種獨特的血清型的病毒組成。小核糖核酸病毒是正鏈RNA 病毒，包括脊髓灰質炎病毒、柯薩奇病毒A組和B組、埃可病毒、腸病毒68-71 型。埃可病毒顆粒體積極小，呈球形，病毒顆粒由簡單的衣殼和單正股RNA組成，裸露無膜，直徑小于30nm。病毒的衣殼含4種蛋白質，分別為VP1、VP2、 VP3、VP4。病毒的RNA為單一分子，長約7.44kb，是病毒翻譯和復制的模板。有64種不同的血清型的腸道病毒可引起人類感染，其中已知埃可病毒有34個血清型。在臨床上病毒的分型主要基于它們的基因特征，埃可病毒屬于人腸道病毒 HEV B種。與其它腸道病毒一樣，埃可病毒的最適生長溫度為35-37℃，能在猴腎、人羊膜細胞、人喉癌細胞、橫紋肌肉瘤、人胚肺等細胞進行培養。

人類埃可病毒30(Echo30)是埃可病毒最常見的類型之一，是引起兒童和成人無菌性腦膜炎的主要病原體。在兒童病毒性腦炎病例中，由Echo30引起的病例占80％～93％。該病毒是一種無胞膜病毒，在高鹽、高pH值等惡劣環境下均可穩定存活。腸道病毒排毒時間長，患者感染后的數周內仍能從呼吸道或腸道中排出病毒，從而引起病毒傳播、感染甚至暴發或流行。近年來在我國臺灣、浙江、福建和河南等地多次報道由Echo30引起病毒性腦炎的暴發或流行。

目前對Echo30相關研究比較少，更無特異性抗體的報道。本申請目的是制備針對Echo30的特異性抗體以便檢測Echo30及其導致的相關疾病。

發明內容

本發明提供與Echo30特異性結合的抗Echo30的抗體或其抗原結合片段。例示性CDR的氨基酸序列以及例示性抗Echo30抗體的重鏈及輕鏈的VH區及VL 區的氨基酸序列提供于下文具體實施方式中。

抗Echo30的抗體可包括更改抗體的特性的修飾和/或突變，這些特性諸如，延長半衰期、增加或減少ADCC等如本領域已知。

本文提供包含編碼本發明的抗Echo30的抗體的核苷酸序列的核酸，以及包含核酸的載體。另外，本文提供用包含編碼所披露的抗Echo30的抗體的核苷酸序列的載體轉化的原核及真核宿主細胞，以及經工程化以表達核苷酸序列的真核 (諸如，哺乳動物)宿主細胞。還提供通過培養宿主細胞及回收抗體來制造抗體的方法，且進一步在下文具體實施方式中論述。

本發明提供檢測Echo30的產品，所述產品包括本發明的Echo30抗體或其抗原結合片段。本發明提供診斷Echo30感染或其導致的疾病的產品，所述產品包括本發明的Echo30抗體或其抗原結合片段。

在另一方面中，本發明提供包括本文所描述的抗Echo30的抗體的組合物。組合物通常包含一種或多種如本文所描述的抗Echo30的抗體和/或其鹽、及一種或多種賦形劑、運載體或稀釋劑。

本發明提供用抗Echo30的抗體治療經診斷患有埃可病毒感染導致的疾病的方法。該方法通常涉及向受試者施用一定量的本文所描述的可有效地提供治療益處的抗Echo30的抗體。

可施用抗Echo30的抗體作為單一治療劑(單藥療法)或輔助通常(但非必需) 用于治療埃可病毒感染導致的疾病的那些的其他治療劑，或與這些其他治療劑一起施用。治療劑通常應以其經批準的劑量、施用途徑及施用頻率來使用，但可以更低的劑量來使用。