[發明專利]副溶血弧菌的快速恒溫檢測方法、引物組及應用

有效

• 申請號: 202010042450.2
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN111057781B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 曹永梅;李園園;李雪玲;韋朝春;賈犇;劉偉;陸長德;李亦學
• 申請（專利權）人: 上海旺旺食品集團有限公司;上海產業技術研究院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.一種非診斷目的的針對副溶血弧菌的恒溫檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）從待測樣品中提取基因組DNA；

（2）以所述基因組DNA為模板，以能擴增副溶血弧菌基因組特異性堿基序列的引物組作為引物，在酶反應體系下進行恒溫擴增反應；

（3）通過判斷反應結果是否為陽性，確定待測樣品中是否存在副溶血弧菌；

其中，所述副溶血弧菌基因組特異性堿基序列為GI號為28899855的副溶血弧菌基因組的22268～23012 bp位序列；

其中，所述能擴增副溶血弧菌基因組特異性堿基序列的引物組為引物組B或引物組B’；

引物組B：

上游外引物F3_B：5’- TGGAAAGAATATACAGTCGC -3’（SEQ ID NO：5）；

下游外引物B3_B：5’- GGTAATTGTGATCACGCTT -3’（SEQ ID NO：6）；

上游內引物FIP_B：5’- GGCAAATCGATTGAATTTTGCCGGTTAGATTCATAGAGACTTCC -3’（SEQID NO：7）；

下游內引物BIP_B：5’- GCAGATTAACCGACTTAGTAGGATGTTAATACGCTCGCGATA -3’（SEQ IDNO：8）；

引物組B’：

上游外引物F3_B：5’- TGGAAAGAATATACAGTCGC -3’；

下游外引物B3_B：5’- GGTAATTGTGATCACGCTT -3’；

上游內引物FIP_B：5’- GGCAAATCGATTGAATTTTGCCGGTTAGATTCATAGAGACTTCC -3’；

下游內引物BIP_B：5’- GCAGATTAACCGACTTAGTAGGATGTTAATACGCTCGCGATA -3’；

下游環引物LB_B：5’- AGAAGTACTGGAAATGCACGAT -3’（SEQ ID NO：18）。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述酶反應體系包括：1× BstDNA聚合酶反應緩沖液，2-9mmol/L Mg²⁺，1.0-1.6mmol/L dNTP，0.8-2.0μmol/L的FIP和BIP引物，0.15-0.3μmol/L的F3和B3引物，0.16-0.64U/μL Bst DNA聚合酶，0-1.5mol/L的甜菜堿，包括或不包括0.4-1.0μmol/L的LB引物。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述恒溫擴增反應的反應程序為：① 60～65℃孵育10～90min；② 80℃終止反應2～20min。