[發明專利]一種冬生疫霉的特異性檢測新靶標Phibe_s00003g00002.1及其應用

有效

• 申請號: 202010041623.9
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111118038B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 戴婷婷;胡濤;汪澳華;焦彬彬;嚴娟;廖婷婷;陳貞鵬
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C07K14/37;C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 王佳妹

1.一種冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的特異性新檢測靶標Phibe_s00003g00002.1，其特征在于，其DNA序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一種冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的特異性檢測新靶標Phibe_s00003g00002.1，其特征在于，其編碼的蛋白序列如SEQ ID NO：2所示。

3.權利要求1或2所述的檢測靶標Phibe_s00003g00002.1在檢測冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)中的應用。

4.權利要求1所述的冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的特異性檢測新靶標Phibe_s00003g00002.1的RPA檢測引物及探針組合，其特征在于，所述檢測引物中，正向引物序列如SEQ ID NO：3所示，反向引物序列如SEQ ID NO：4所示，所述探針序列如SEQ IDNO：5所示。

5.權利要求4所述的檢測引物和探針組合在檢測冬生疫霉(Phytophthorahibernalis)中的應用。

6.一種檢測冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的試劑盒，其特征在于，至少包括1次用量以上的權利要求4所述的檢測引物和探針組合。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：裝有凍干酶粉的Twist Amp反應單元管、緩沖液Buffer、MgAc、去離子水、HybriDetect assay buffer、側流層析試紙條。

8.權利要求7所述的試劑盒在檢測冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)中的應用。

9.一種檢測冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測樣本DNA；

2)以DNA為模板，利用權利要求4所述的引物和探針組合或權利要求6所述的檢測冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的試劑盒進行RPA擴增；

3)應用側流層析試紙條進行RPA擴增產物檢測；當試紙條出現兩條棕色條帶，一條位于質控區內，一條位于檢測區，則結果為陽性，表明樣本中含有冬生疫霉(Phytophthorahibernalis)；當試紙條只有質控區出現一條棕色條帶，檢測區沒有條帶，則結果是陰性，表明樣本中不含有冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)。