[發明專利]一種用于葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）基因突變檢測的引物序列及試劑盒

有效

• 申請號: 202010041230.8
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111118141B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 虞閏六;康桃;宣文靜;任緒義;郭惠民
• 申請（專利權）人: 浙江迪譜診斷技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 宮建華

1.一組用于G6PD基因致病性突變區域擴增的引物組合序列，其特征在于，包括如下所示引物：

擴增位點為rs137852340的擴增引物序列如SEQ?ID?NO：1～2所示；

擴增位點為rs78365220和rs137852341的擴增引物序列如SEQ?ID?NO：3～4所示；

擴增位點為rs137852314、rs137852331、rs137852343和rs137852330的擴增引物序列如SEQ?ID?NO：5～6所示；

擴增位點為rs137852327、rs1557229854和rs137852342的擴增引物序列如SEQ?ID?NO：7～8所示；

擴增位點為rs2230037、rs398123546、rs72554665、rs782608284、rs1557229502和rs72554664的擴增引物如SEQ?ID?NO：9～10所示；

檢測位點為rs137852314的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：11；

檢測位點為rs137852343的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：12；

檢測位點為rs137852330的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：13；

檢測位點為rs1557229854的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：14；

檢測位點為rs137852327的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：15；

檢測位點為rs137852342的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：16；

檢測位點為rs72554664的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：17；

檢測位點為rs72554665的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：18；

檢測位點為rs137852341的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：19；

檢測位點為rs137852340的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：20；

檢測位點為rs78365220的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：21；

檢測位點為rs398123546的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：22；

檢測位點為rs2230037的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：23；

檢測位點為rs782608284的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO24；

檢測位點為rs137852331的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：25；

和檢測位點為rs1557229502的單堿基延伸反應引物為SEQ?ID?NO：26。

2.一種用于檢測G6PD基因常見致病性突變的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括如下試劑：

(1)飛行時間質譜檢測系統核酸樣本預處理試劑：包括如下主要組分

(2)擴增反應引物預混合液：SEQ?ID?NO：1～10所示的核苷酸序列的混合液，各引物濃度為0.3～3μM；

(3)單堿基延伸反應引物預混合液：SEQ?ID?NO：11～26所示的核苷酸序列的混合液，各引物濃度介于5～30μM；

(4)除鹽樹脂：包括去除延伸反應液鹽離子的陽離子交換樹脂粉末；

(5)檢測芯片：包括含384個已預點基質的檢測點的硅基芯片；

(6)純突變對照：包含如權利要求1所述的16個位點突變陽性的人G6PD基因對應片段質粒水溶液，濃度大于500拷貝/μL；

(7)雜合對照：包含如權利要求1所述的16個位點突變陽性的人G6PD基因對應片段質粒、野生型人基因組DNA(gDNA)的混合水溶液，突變型質粒和野生型人gDNA拷貝濃度相等，濃度大于500拷貝/μL；以及

(8)純野生對照：包含野生型人gDNA的水溶液，G6PD基因濃度大于500拷貝/μL。

3.根據權利要求2所述的用于G6PD基因常見致病性突變檢測的試劑盒，其特征在于，所述擴增反應引物預混合液具體為：如權利要求1所述的SEQ?ID?NO：1～10所示的引物的混合液，各引物等比例混合，最終摩爾濃度濃度均為0.5μM。

4.根據權利要求2所述的用于G6PD基因常見致病性突變檢測的試劑盒，其特征在于，所述擴增反應引物預混合液具體為：如權利要求1所述的SEQ?ID?NO：1～6所示引物濃度0.5μM；SEQ?ID?NO：7～8所示引物濃度1μM；SEQ?ID?NO：9～10所示引物濃度2μM。