[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）基因突變檢測(cè)的引物序列及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010041230.8
• 申請(qǐng)日: 2020-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111118141B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 虞閏六;康桃;宣文靜;任緒義;郭惠民
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江迪譜診斷技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 宮建華

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于檢測(cè)葡萄糖?6?磷酸脫氫酶(G6PD)缺乏癥相關(guān)致病突變的引物序列及試劑盒。試劑盒包括5對(duì)擴(kuò)增引物，能特異地?cái)U(kuò)增G6PD缺乏癥相關(guān)G6PD基因16個(gè)常見(jiàn)突變位點(diǎn)區(qū)域；16條單堿基延伸引物，用于檢測(cè)G6PD基因16個(gè)突變位點(diǎn)基因型；另外包括預(yù)處理及檢測(cè)專(zhuān)用試劑。本發(fā)明所述試劑盒可實(shí)現(xiàn)1孔檢測(cè)臨床G6PD缺乏癥致病相關(guān)常見(jiàn)16種突變，靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高，并且操作簡(jiǎn)便、低成本、高通量，檢測(cè)快速，結(jié)果自動(dòng)判讀，易于臨床推廣應(yīng)用。本發(fā)明可應(yīng)用于產(chǎn)前診斷或新生兒遺傳病篩查檢測(cè)，為G6PD缺乏癥攜帶者或患者的快速檢測(cè)提供一種可靠的檢測(cè)試劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF)平臺(tái)的用于葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)基因突變檢測(cè)的引物序列及試劑盒。

背景技術(shù)

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥(glucose-6-phosphate?dehydrogenasedeficiency,G6PDd)是因調(diào)控葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphatedehydrogenase,G6PD)基因突變導(dǎo)致其G6PD活性降低所致，屬伴X連鎖不完全顯性遺傳病。其發(fā)病常由誤食蠶豆而誘發(fā)，故又稱(chēng)“蠶豆病”。患者在感染、氧化應(yīng)激、食物或藥物誘發(fā)等情況下，可發(fā)生急性溶血性貧血、高膽紅素血癥，嚴(yán)重者可致核黃疸，甚至危及生命。本病重在預(yù)防，通過(guò)新生兒疾病篩查及時(shí)發(fā)現(xiàn)G6PDd患者。避免接觸食物、藥物等誘發(fā)因素，是對(duì)該病進(jìn)行預(yù)防的主要措施。全世界約2億人罹患此病，中國(guó)是本病的高發(fā)區(qū)之一，在海南、廣東、廣西、云南、貴州、四川等我國(guó)南方地區(qū)高發(fā),呈南高北低的分布特點(diǎn)，且男性發(fā)病率高于女性，患病率為0.2-44.8％。

G6PDd的致病原因是G6PD基因突變，G6PD基因位于Xq28，長(zhǎng)約20kb，包含13個(gè)外顯子，編碼515個(gè)氨基酸的蛋白酶，起始密碼子位于第2外顯子，第1外顯子不參與翻譯。目前已報(bào)道的致病性突變有214種。而不同的基因突變類(lèi)型，可以導(dǎo)致G6PD結(jié)構(gòu)不一樣，酶活性有差異，即使G6PD基因沒(méi)有功能缺失，也有可能存在不同程度缺乏。

G6PDd男性多于女性，因?yàn)槟行灾挥幸粭lX染色體,一旦這唯一的染色體G6PD基因功能缺失,則表現(xiàn)為G6PD重度缺乏；女性有兩條X染色體,如果僅有1條X染色體G6PD基因功能缺失,則為雜合子,表現(xiàn)為中度缺乏,兩條X染色體均缺失G6PD基因才表現(xiàn)為重度缺乏。

將G6PD缺乏癥的致病性變異分為I-IV類(lèi)：I類(lèi)致病性變異導(dǎo)致酶活性嚴(yán)重缺乏，伴先天性非球形細(xì)胞溶血性貧血，主要位于外顯子6、10和13，這些致病性變異所編碼的氨基酸多位于底物結(jié)合區(qū)、NADP+輔酶結(jié)合區(qū)等重要結(jié)構(gòu)域；II類(lèi)致病性變異導(dǎo)致酶活性嚴(yán)重缺乏；III類(lèi)致病性變異導(dǎo)致酶活性輕中度缺乏；IV類(lèi)致病性變異導(dǎo)致酶活性輕度降低或正常(主要為外顯子5和9的致病性變異)。大部分導(dǎo)致G6PD缺乏癥的致病性變異屬于I、II、III類(lèi)，極少數(shù)為IV類(lèi)。

G6PD缺乏癥的臨床表現(xiàn)與一般溶血性貧血大致相同。分新生兒黃疸、蠶豆病、藥物性溶血、感染性溶血、非球形細(xì)胞溶血性貧血等臨床類(lèi)型。多數(shù)患者癥狀較輕，特別是女性雜合子，平時(shí)不發(fā)病，無(wú)自覺(jué)癥狀，部分患者可表現(xiàn)為慢性溶血性貧血癥狀。常因食用蠶豆、服用或接觸某些藥物、感染等誘發(fā)血紅蛋白尿、黃疸、貧血等急性溶血反應(yīng)。但少數(shù)患者因G6PD缺乏誘發(fā)的嚴(yán)重的急性溶血性貧血。因紅細(xì)胞破壞過(guò)多，如不及時(shí)處理，可引起肝、腎、或心功能衰竭，甚至死亡。G6PD缺乏癥是新生兒病理性黃疸的主要原因,患G6PD缺乏癥的新生兒中，約50％的患兒會(huì)出現(xiàn)新生兒黃疸，其中約12％可發(fā)展為核黃疸，導(dǎo)致腦部損害，引起智力低下。

G6PDd的及早診斷和預(yù)防是我國(guó)優(yōu)生優(yōu)育工作的一個(gè)重要組成部分。因此，我國(guó)多個(gè)省份已開(kāi)始對(duì)育齡夫婦G6PD進(jìn)行篩查，并將G6PDd列入新生兒疾病篩查常規(guī)項(xiàng)目。