[發(fā)明專利]食源性致病菌高通量SERS檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010041058.6
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111398241A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 白向茹;王利華;肖康飛;韓艷云
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 武漢河山金堂專利事務(wù)所(普通合伙) 42212
• 代理人: 胡清堂

1.食源性致病菌高通量SERS檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)靜默區(qū)功能性檢測探針的制備

首先選用粒徑大于30nm的金、銀或核殼材料作為SERS信號的增強基底，將含巰基的靜默區(qū)拉曼信號分子自組裝于所述增強基底表面，并對其信號輸出強度進行優(yōu)化，然后選擇生物相容性好、親水且富含活性反應(yīng)基團的分子進行包裹，最后在包裹材料外層連接特定的靶向功能分子，即得到無光學(xué)干擾的靜默區(qū)功能檢測探針；

(2)功能性捕獲探針的制備

特定粒徑的羧基磁珠，基于EDC-NHS反應(yīng)，在其表面連接特定的靶向功能分子，即得到功能性捕獲探針；

(3)兩種食源性致病菌高通量同時SERS檢測標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立

兩種食源性致病菌同時存在時，在不同濃度下，分別加入兩種功能性捕獲探針對兩種食源性致病菌分別進行捕獲，再加入兩種功能性檢測探針，分別靶向?qū)?yīng)食源性致病菌表面，形成磁珠-食源性致病菌-檢測探針的三明治夾心結(jié)構(gòu)，然后將其在磁力作用下分離并聚焦于拉曼光譜儀激光下，進行拉曼測試，分別建立兩種檢測探針中對巰基苯乙炔分子在2106cm^-1處及對巰基苯甲腈分子在2228cm^-1處的峰強度y與相對應(yīng)的致病菌濃度x的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

(4)兩種食源性致病菌含量的測定

在待測樣品中分別加入不同濃度的兩種食源性致病菌，然后分別加入功能性捕獲探針和功能性檢測探針后孵育，進行拉曼測試，得到對巰基苯乙炔分子在2106cm^-1處和對巰基苯甲腈分子在2228cm^-1處的峰強度，將所述峰強度與步驟(3)中建立的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線進行對比，確定待測樣品中兩種食源性致病菌的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食源性致病菌高通量SERS檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中SERS增強基底包括不同形狀、不同尺寸的金、銀或核殼材料結(jié)構(gòu)的納米材料。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食源性致病菌高通量SERS檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中靜默區(qū)拉曼信號分子，包括一切帶巰基且拉曼位移在生物靜默區(qū)的分子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食源性致病菌高通量SERS檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中包裹材料為可提供裸露氨基的所有聚合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食源性致病菌高通量SERS檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中羧基磁珠粒徑為380nm-1μm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食源性致病菌高通量SERS檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)或(2)中靶向功能分子是與檢測對象相關(guān)的抗體、配體、肽鏈或其他化學(xué)或生物分子。