[發明專利]唐古特虎耳草中天然自由基清除劑的分離工藝及其應用

有效

• 申請號: 202010041021.3
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111187159B
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 黨軍;陶燕鐸;王啟蘭;邵赟
• 申請（專利權）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: C07C51/47
• 分類號: C07C51/47;C07C65/03;C07C67/56;C07C69/84;C07H15/203;C07H1/08;A61K31/192;A61K31/235;A61K31/7034;A61P39/06;A23L33/105
• 代理公司: 成都華風專利事務所(普通合伙) 51223
• 代理人: 杜朗宇

本發明涉及唐古特虎耳草中天然自由基清除劑分離技術領域，具體涉及唐古特虎耳草中天然自由基清除劑的分離工藝及其應用。其制備方法：提取、微孔樹脂柱粗分、在線自由基清除劑組分篩選、反相制備柱制備、Fr1?1的反相制備液相色譜純化及Fr1?3的親水/反相二維液相色譜純化六個步驟。本發明成本低廉、產品純度大于95%；本發明采用的技術手段可進行規模化生產：原料要求不高、成本低廉，易于批量備料；甲醇室溫冷浸提取，易于操作；分離采用微孔樹脂柱粗分，該微孔樹脂分離材料可以裝于中壓柱層析系統中，易于規模化；分離純化中使用的反相制備液相色譜或親水制備液相色譜，為快速的等度方法。

技術領域

本發明涉及唐古特虎耳草中天然自由基清除劑分離技術領域，具體涉及唐古特虎耳草中天然自由基清除劑的分離工藝及其應用。

背景技術

唐古特虎耳草（Saxifraga tangutica Engl.），別名甘青虎耳草，是虎耳草科（Saxifragaceae）虎耳草屬（Saxifraga）的一年生常綠草本植物，藏藥名：“松吉蒂”，中藥中稱之為“迭達”，主要分布在青海、甘肅、西藏、四川以及及不丹與克什米爾地區海拔2900~4900米的針葉林灌叢下。唐古特虎耳草為常用藏藥，可全草入藥，《中藥辭海》記載：其性味微苦、辛、寒。主要功效：清肝利膽，補脾健胃。主治：肝炎，膽囊炎，流行性感冒。現代藥理學研究證明酚類是主要活性成分。文獻報道，酚類化合物具有良好的清除自由基活性。但目前僅有本課題發表的8個抗氧化的酚類化合物從唐古特虎耳草中被分離并鑒定（Jun Dang,Yanduo Tao, Yun Shao, et al. Antioxidative extracts and phenols isolated fromQinghai-Tibet Plateau medicinal plant Saxifraga tangutica Engl. IndustrialCrops and Products, 2015, 78: 13-18）。為了進一步加快唐古特虎耳草的質量評價、生產銷售及相關新藥的研發步伐，有必要從中挖掘更多的活性成分。

目前，有關唐古特虎耳草中天然自由基清除劑的分離制備工藝及其應用并未見文獻報道，已有的研究也未做到系統化的研究。因此，亟需建立一種工藝簡單、規模化從唐古特虎耳草中分離制備天然自由基清除劑的方法。

發明內容

基于上述問題，本發明的目的在于提供唐古特虎耳草中天然自由基清除劑的分離工藝及其應用。

唐古特虎耳草中天然自由基清除劑的分離工藝，該方法具體包括如下步驟：

步驟1，提取：將唐古特虎耳草全草陰干，粗碎后按料液比1g：5~100mL的甲醇提取，在室溫下提取2~4次，每次2~4 h，過濾、合并濾液，即濾液A，該濾液A按聚酰胺的量：唐古特虎耳草藥材的量=1:5拌樣并減壓干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌樣樣品；

步驟2，微孔樹脂柱粗分：唐古特虎耳草提取物拌樣樣品，該樣品經裝有微孔樹脂的中壓色譜塔分離，經檢測波長為254 nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中第一個主要的色譜峰餾分，該餾分經減壓干燥即得目標組分；

步驟3，在線自由基清除劑組分篩選：在所述唐古特虎耳草含有目標成分的組分中加入其質量5~10倍的體積濃度為70~90%的甲醇進行溶解，配制樣品濃度為50.0~100.0 mg/mL，經0.45 μm微孔濾膜過濾，得到唐古特虎耳草甲醇樣品溶液，即濾液B，取1mL濾液B，利用在線HPLC-DPPH色譜聯用系統篩選唐古特虎耳草含有目標成分的組分中自由基清除劑；