[發明專利]檢測平菇中吲哚乙酸含量的方法

在審

• 申請號: 202010040839.3
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111103282A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 孔維麗;崔筱;劉芹;張玉亭;康源春;袁瑞奇;孔維威;胡素娟;段亞魁;宋志波;韓玉娥
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院植物營養與資源環境研究所;河南信念現代農業產業研究院
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 韓鵬程

本發明公開了一種檢測平菇中吲哚乙酸含量的方法，利用預凍的80%冰甲醇提取平菇樣品中的吲哚乙酸，利用三氯化鐵的無機酸溶液作為顯色液，采用分光光度計測定樣品中吲哚乙酸的吸光值，通過該吸光值計算得到平菇樣品中吲哚乙酸的含量。本發明利用在?20℃預凍12h以上的80%冰甲醇（甲醇:水=4:1）作為提取溶劑，能夠有效提取平菇中的吲哚乙酸。本發明利用吲哚乙酸在高氯酸環境中與三價鐵離子生成紅色絡合物的原理，采用分光光度計法測定平菇中吲哚乙酸在530nm處的吸光值，該方法不僅操作簡單、成本低，還具有較高的靈敏度和檢測精度，還能夠同批次檢測多個平菇樣品中的吲哚乙酸含量，分析速度快，為研究吲哚乙酸對平菇生長發育機制的影響提供技術基礎。

技術領域

本發明涉及平菇中吲哚乙酸的檢測，尤其是涉及一種檢測平菇中吲哚乙酸含量的方法。

背景技術

生長素（化學本質為吲哚乙酸，即IAA）作為一種重要的植物激素，其影響細胞分裂、伸長和分化，也影響營養器官和生殖器官的生長、成熟和衰老。研究發現，植物體內快速分裂和生長的部位，如莖葉分生組織、幼嫩的葉片等組織、幼嫩的果實和種子等部位中生長素含量都比較高，促進植物及果實的生長發育。

平菇（Pleurotus ostreatus）學名側耳，又名北風菌、凍菌、蠔菌、鮑魚菇等，其味道鮮美、營養豐富、具有很高的食用價值，目前已經在我國很多地區得到了大面積栽培。平菇的生長發育周期包括菌絲生長階段和子實體生長階段，平菇發育周期的長短是影響平菇栽培成本高低的重要因素。目前，平菇生長發育相關的研究主要集中在外界環境因子（如光照、溫度和氧氣等），尚未出現平菇中吲哚乙酸含量的檢測方法的報道，使得有關生產素對平菇生長發育影響的報道很少。

發明內容

本發明目的在于提供一種檢測平菇中吲哚乙酸含量的方法，該檢測方法簡單、靈敏度高、分析速度快且成本低，為吲哚乙酸對平菇生長發育機制的相關研究提供技術參考。

為實現上述目的，本發明采取下述技術方案：

本發明所述的檢測平菇中吲哚乙酸含量的方法，采用分光光度計測定平菇樣品中吲哚乙酸的吸光值，通過該吸光值計算得到平菇樣品中吲哚乙酸的含量，具體包括以下步驟：

第一步，稱取平菇樣品于無菌研缽中，向無菌研缽中快速加入3～10mL預凍的80%冰甲醇，研磨，將研磨后的平菇漿液移取至離心管內，用80%冰甲醇將平菇漿液定容，離心分離，棄沉淀，得到含有吲哚乙酸的樣品提取液，備用；

第二步，稱取吲哚乙酸于燒杯中，用無水乙醇溶解后轉移至容量瓶中，然后用蒸餾水定容，混勻，得到吲哚乙酸貯備液；將吲哚乙酸貯備液稀釋得到不同濃度的吲哚乙酸標準溶液；

第三步，移取第二步稀釋得到的各吲哚乙酸標準溶液于不同的反應管內，以等體積的蒸餾水作為空白，然后向吲哚乙酸標準液和空白中分別加入顯色液，混勻，恒溫顯色反應20～40min后，用分光光度計測定吲哚乙酸標準液的吸光值，以吲哚乙酸的濃度為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪制吲哚乙酸標準曲線；

第四步，移取第一步中的樣品提取液于反應管內，以與樣品提取液等體積的蒸餾水為空白，向樣品提取液和空白中分別加入顯色液，遮光恒溫顯色反應20～40min后，用分光光度計測定平菇樣品的吸光值，根據第三步中繪制的吲哚乙酸標準曲線計算得到樣品提取液中吲哚乙酸的濃度，再利用下述公式計算平菇樣品中吲哚乙酸的含量，

平菇樣品中吲哚乙酸的含量（μg/g）=（A×V₁）÷（W×V₂）；

其中，A為第四步中參加顯色反應的菌絲提取液中吲哚乙酸的濃度，μg/mL；V₁為平菇樣品提取液的總體積，mL；W為平菇樣品的重量，g；V₂為第四步中參加顯色反應的樣品提取液體積，mL。