[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)平菇中吲哚乙酸含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010040839.3
• 申請(qǐng)日: 2020-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111103282A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孔維麗;崔筱;劉芹;張玉亭;康源春;袁瑞奇;孔維威;胡素娟;段亞魁;宋志波;韓玉娥
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物營(yíng)養(yǎng)與資源環(huán)境研究所;河南信念現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/78
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 鄭州異開(kāi)專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 41114
• 代理人: 韓鵬程

1.一種檢測(cè)平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：采用分光光度計(jì)測(cè)定平菇樣品中吲哚乙酸的吸光值，通過(guò)該吸光值計(jì)算得到平菇樣品中吲哚乙酸的含量，具體包括以下步驟：

第一步，稱(chēng)取平菇樣品于無(wú)菌研缽中，向無(wú)菌研缽中快速加入3～10mL預(yù)凍的80%冰甲醇，研磨，將研磨后的平菇漿液移取至離心管內(nèi)，用80%冰甲醇將平菇漿液定容，離心分離，棄沉淀，得到含有吲哚乙酸的樣品提取液，備用；

第二步，稱(chēng)取吲哚乙酸于燒杯中，用無(wú)水乙醇溶解后轉(zhuǎn)移至容量瓶中，然后用蒸餾水定容，混勻，得到吲哚乙酸貯備液；將吲哚乙酸貯備液稀釋得到不同濃度的吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；

第三步，移取第二步稀釋得到的各吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于不同的反應(yīng)管內(nèi)，以等體積的蒸餾水作為空白，然后向吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)液和空白中分別加入顯色液，混勻，恒溫顯色反應(yīng)20～40min后，用分光光度計(jì)測(cè)定吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)液的吸光值，以吲哚乙酸的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；

第四步，移取第一步中的樣品提取液于反應(yīng)管內(nèi)，以與樣品提取液等體積的蒸餾水為空白，向樣品提取液和空白中分別加入顯色液，遮光恒溫顯色反應(yīng)20～40min后，用分光光度計(jì)測(cè)定平菇樣品的吸光值，根據(jù)第三步中繪制的吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到樣品提取液中吲哚乙酸的濃度，再利用下述公式計(jì)算平菇樣品中吲哚乙酸的含量：

平菇樣品中吲哚乙酸的含量（μg/g）=（A×V₁）÷（W×V₂）；

其中，A為第四步中參加顯色反應(yīng)的菌絲提取液中吲哚乙酸的濃度，μg/mL；V₁為平菇樣品提取液的總體積，mL；W為平菇樣品的重量，g；V₂為第四步中參加顯色反應(yīng)的樣品提取液體積，mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第二步中吲哚乙酸貯備液的濃度為100μg/mL，所述吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)液的濃度梯度為0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL和25μg/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第三步和第四步中的顯色液均由濃度為0.5M的FeCl₃和35%高氯酸按照1:50的體積比配制而成。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第一步中的具體離心方法如下：將定容后的平菇漿液于4℃、5000r/min條件下離心10min，棄沉淀，再將上清液再于4℃、5000r/min條件離心10min，棄沉淀，得到含有吲哚乙酸的樣品提取液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第一步中80%冰甲醇的預(yù)凍溫度為-20℃。