[發明專利]一種雙功能納米顆粒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202010039626.9
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111097045B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發明（設計）人: 杜金志;張亞茹;羅佳琪;繆瑋珉;黃華;巫佳思;張京揚;李佳賢;黃永聰;舒娜
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K38/17;A61K47/69;A61K47/52;A61P35/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍;馮振寧

1.一種雙功能納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將無水乙醇、水、氨水混合，然后攪拌均勻，得到混合物，接著往所述混合物中加入正硅酸乙酯，升溫進行油浴加熱處理，離心取沉淀，洗滌，干燥得到二氧化硅納米顆粒；

(2)將步驟(1)所述二氧化硅納米顆粒加入無水甲苯中，超聲分散均勻，然后再加入硅烷偶聯劑，攪拌反應，離心取沉淀，然后離心洗滌，得到改性后的二氧化硅納米顆粒；

(3)將步驟(2)所述改性后的二氧化硅納米顆粒加入N,N-二甲基甲酰胺中，超聲分散均勻，然后再加入疊氮化鈉，攪拌反應，離心取沉淀，然后洗滌，得到疊氮基團改性的二氧化硅納米顆粒；

(4)將DBCO-PEG₄-NHS溶于二甲亞砜中，混合均勻，得到DBCO-PEG₄-NHS溶液；將Anti-CD47加入所述DBCO-PEG₄-NHS溶液中，混合均勻，然后進行孵育處理，超濾離心，取超濾管中的保留液，得到DBCO-PEG₄-CD47溶液；

(5)將鈣網蛋白加入步驟(4)所述DBCO-PEG₄-NHS溶液中，混合均勻，進行孵育處理，超濾離心，取超濾管中的保留液，得到DBCO-PEG₄-CRT溶液；

(6)將步驟(3)所述疊氮基團改性的二氧化硅納米顆粒加入水中，分散均勻，得到分散液，然后加入步驟(4)所述DBCO-PEG₄-CD47溶液和步驟(5)所述DBCO-PEG₄-CRT溶液，攪拌處理，得到混合液，離心取沉淀，洗滌，得到所述雙功能納米顆粒。

2.根據權利要求1所述的雙功能納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述無水乙醇與水的體積比為83：15-20；所述氨水的質量百分比濃度為25wt％-30wt％，所述氨水與水的體積比為5.6：1.5-2；所述正硅酸乙酯與水的體積比為5：1.5-2；所述油浴加熱處理的溫度為40℃，油浴加熱處理的時間為10-24小時。

3.根據權利要求1所述的雙功能納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述無水甲苯與二氧化硅納米顆粒的體積質量比為40-60mL：1g；所述硅烷偶聯劑為3-氯丙基三甲氧基硅烷或3-溴丙基三甲氧基硅烷；所述硅烷偶聯劑與二氧化硅納米顆粒的體積質量比為1.3-1.6mL：1g。

4.根據權利要求1所述的雙功能納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述N,N-二甲基甲酰胺與改性后的二氧化硅納米顆粒的體積質量比為10-20mL：1g；所述疊氮化鈉的質量為所述改性后的二氧化硅納米顆粒質量的0.3-0.5倍。

5.根據權利要求1所述的雙功能納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述DBCO-PEG₄-NHS購自click chemistry tools公司，貨號為A134-100；所述DBCO-PEG₄-NHS溶液的濃度為5-15mg/mL；所述Anti-CD47與DBCO-PEG₄-NHS的摩爾比為1:20-1:50；所述超濾離心中使用的超濾管截留分子量為3K-100K。

6.根據權利要求1所述的雙功能納米顆粒的制備方法，其特征在于，步驟(5)所述鈣網蛋白與步驟(4)所述DBCO-PEG₄-NHS的摩爾比為1:20-1:50；步驟(5)所述超濾離心中使用的超濾管截留分子量為3K-100K；步驟(6)所述疊氮基團改性的二氧化硅納米顆粒與水的質量體積比為1:1-1:2mg/mL；步驟(6)所述DBCO-PEG₄-CD47溶液與DBCO-PEG₄-CRT溶液的體積比為1-3:1-3；步驟(6)所述DBCO-PEG₄-CD47溶液與水的體積比為0.5-1.5：10-20；步驟(6)所述DBCO-PEG₄-CD47溶液的濃度為30-40μg/mL；步驟(6)所述DBCO-PEG₄-CRT溶液的濃度為30-40μg/mL。