[發明專利]固定化酶、其制備方法及應用在審
| 申請號： | 202010038661.9 | 申請日： | 2020-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN111117996A | 公開（公告）日： | 2020-05-08 |
| 發明（設計）人： | 洪浩;詹姆斯·蓋吉;肖毅;羅杰斯卡·維亞撒·威廉姆斯;崔瑜霞;張娜;趙佳東;高妍妍 | 申請（專利權）人： | 吉林凱萊英醫藥化學有限公司 |
| 主分類號： | C12N11/098 | 分類號： | C12N11/098 |
| 代理公司： | 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240 | 代理人： | 梁文惠 |
| 地址： | 133700 吉林省延邊朝*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 固定 制備 方法 應用 | ||
1.一種固定化酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
采用聚乙二醇修飾交聯劑，得到聚乙二醇修飾的交聯劑；
將游離的酶共沉淀，同時加入所述聚乙二醇修飾的交聯劑進行交聯固定得到所述固定化酶。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述采用聚乙二醇修飾交聯劑的步驟包括：交聯劑與聚乙二醇混合，得到所述聚乙二醇修飾的交聯劑；
優選的，所述聚乙二醇為PEG 2000～PEG 6000；
優選的，所述聚乙二醇與所以交聯劑的質量比為1:5～5:1，更有選的，質量比為1:2～3:1；
優選的，所述交聯劑為戊二醛或醛基化右旋糖苷
優選的，在室溫下混合3～20小時。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述酶為ω-轉氨酶、酮還原酶、環己酮單加氧酶、氨裂解酶、烯還原酶、亞胺還原酶、亮氨酸脫氫酶或腈水解酶。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述將游離的酶沉淀包括：
將沉淀劑滴加至含游離酶的溶液中，或將含游離酶的溶液滴加至沉淀劑中；
優選的，所述將游離酶沉淀操作包括將沉淀劑滴加至含游離酶的溶液中，或將含游離酶的溶液滴加至沉淀劑中攪拌。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述沉淀劑為選自由硫酸銨、乙醇、正丙醇、異丙醇、乙腈、PEG 2000-6000和丙酮組成的組中的一種或多種；其中，作為沉淀劑，硫酸銨的濃度為20～70g/100mL，優選為30～60g/100mL；乙醇的濃度為60～90g/100mL，優選為70～90g/100mL；正丙醇的濃度為50～90g/100mL，優選為60～80g/100mL；乙腈的濃度為50～90g/100mL，優選為60～70g/100mL；丙酮的濃度為50～90g/100mL，優選為60～80g/100mL；PEG 2000-6000的濃度為10～60g/100mL，優選為20～40g/100mL。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述聚乙二醇修飾的交聯劑在酶沉淀和聚乙二醇修飾的交聯劑進行交聯的反應體系中的濃度為20mM～300mM，更優選為50～250mM；
優選的，所述反應體系的溫度為2～30℃；
優選的，攪拌所述反應體系0.5～20h后抽濾，用緩沖液洗得到的固定化酶，優選的，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液。
7.一種固定化酶，其特征在于，所述固定化酶通過如權利要求1至6中任一項所述的制備方法制備得到。
8.根據權利要求7所述的固定化酶，其特征在于，所述固定化酶為ω-轉氨酶、酮還原酶、環己酮單加氧酶、氨裂解酶、烯還原酶、亞胺還原酶、亮氨酸脫氫酶或腈水解酶的固定化酶。
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