[發明專利]一種藏藥十八味訶子利尿丸的應用及其對2型糖尿病腦病大鼠的腦保護作用的試驗方法

有效

• 申請號: 202010038129.7
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111358961B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 吳穹;劉永年;沈國雙;馬曉雨;黎婭;張月;常秀君;韓蕙竹;何敏;解安達
• 申請（專利權）人: 青海大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K36/9066;A61P3/10;A61P25/00;A23K50/50;A23K10/30;A23K10/37;A23K10/22;A23K10/26;A23K10/18;A23K20/158;A23K20/163;A23K20/168;A61K
• 代理公司: 重慶萃智邦成專利代理事務所(普通合伙) 50231
• 代理人: 舒夢來

本發明提供一種藏藥十八味訶子利尿丸的應用及其對2型糖尿病腦病大鼠的腦保護作用方法。通過高海拔地區糖尿病腦病模型的實際造模操作，本發明提供一種老藥新用途徑。藏藥十八味訶子利尿丸藥物，在臨床上用于對糖尿病、腎病、尿頻、腰腎疼痛等病癥，但本發明發現可對糖尿病腦病也起一定的保護作用。

技術領域

本發明屬于醫學藥物領域，涉及一種藏藥十八味訶子利尿丸對2型糖尿病腦病大鼠的腦保護作用方法。

背景技術

藏藥十八味訶子利尿丸為傳統藏藥制劑，處方源自《藏醫醫訣補遺》，收載于《衛生部藥品標準》1995年版藏藥第一冊中，是以訶子(去核)、紅花、豆蔻、余甘子、姜黃、小檗皮、蒺藜、金門石、刺柏、刀豆、熊膽、人工牛黃等十八味藥制成的復方制劑。臨床上主要應用于糖尿病、腎病、尿頻、腰腎疼痛等癥。中藏藥多組分、多靶點作用方式，是其區別于西藥的特色和優勢所在。但是，也正是由于這種作用的復雜性，給中藏藥的研究帶來了巨大的困難。

發明內容

為彌補現有技術的不足，本發明提供了一種藏藥十八味訶子利尿丸對2型糖尿病腦病大鼠的腦保護作用方法。

本發明提供了一種藏藥十八味訶子利尿丸對2型糖尿病腦病大鼠的腦保護作用方法，包括以下步驟：

步驟1，選取SPF級SD雄性大鼠，4周齡，體重為80-100g,使用普通飼料適應性喂養1周后，采用高脂飼料聯合鏈脲佐菌素造模，模擬2型糖尿病腦病并發癥動物模型；將大鼠隨機分為正常對照組、糖尿病組；其中正常對照組給予普通飼料喂養，糖尿病腦病組給予高脂飼料喂養，喂養持續14周；

步驟2，將糖尿病腦病組大鼠禁食10-12h,按照STZ總劑量為20mg/kg 進行尾靜脈注射，正常對照組給予相同劑量的杅檬酸鈉緩沖液。STZ注射1周后，尾靜脈檢測大鼠隨機血糖，血糖≥16.7mmol/L判斷糖尿病造模成功；

步驟3，繼續飼養6周后通過Mirros水迷宮實驗篩選2型糖尿病腦病大鼠：前4d為訓練，每天下午訓練4次，每只大鼠每次訓練2min，將大鼠面向池壁隨機從4個入水點放入水中，記錄從入水到找到站臺所用的時間作為測試成績；如果大鼠在2min內未找到平臺，逃避潛伏期計為2min，并由實驗者將其牽引至平臺上，停留30s后，放回籠中休息30min之后，開始下一次測試；第5天為測試期，記錄逃避潛伏期；

步驟4，同正常對照組比較，逃避潛伏期明顯延長，且出現認知功能減退的視為2型糖尿病腦病大鼠；將篩選出的2型糖尿病腦病大鼠隨機分為糖尿病腦病組及藏藥組；

步驟5，開始灌胃：灌胃周期為4周，灌胃方法為隔天灌胃，灌胃前禁食(不禁水)4-6h；藏藥十八味訶子利尿丸灌胃劑量為350mg/kg,溶于3ml生理鹽水；灌胃4周后，再次行Mirros水迷宮實驗，實驗步驟同步驟3，記錄逃避潛伏期；

步驟6，處死取大鼠腦部海馬組織；

步驟7，Fluo-jade-c染色分析海馬神經元退行性變化；Western blots檢測海馬NF-κB水平；

步驟8，統計分析。

STZ即鏈脲佐菌素。

優選的，步驟1中的普通飼料組分為：小麥10份，麩子30份，玉米面30 份，豆餅20份，魚粉5份，骨粉2份，酵母2份和食鹽1份。

優選的，步驟2中的高脂飼料組分為：小麥10份，麩子30份，玉米面30 份，豆餅20份，魚粉5份，骨粉2份，酵母2份，食鹽1份，豬油5份、酥油 5份、蔗糖10份、膽固醇2.5份、膽酸鈉1份。

優選的，高脂喂養14周，行糖耐量、胰島素耐量試驗，建立胰島素抵抗模型后給予小劑量STZ尾靜脈注射。

優選的，糖尿病模型成模標準：(1)STZ注射前存在胰島素抵抗；(2)STZ 注射1周后，隨機血糖≥16.7mmol/L。