[發(fā)明專利]一種藏藥十八味訶子利尿丸的應(yīng)用及其對(duì)2型糖尿病腦病大鼠的腦保護(hù)作用的試驗(yàn)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010038129.7
• 申請(qǐng)日: 2020-01-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111358961B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳穹;劉永年;沈國(guó)雙;馬曉雨;黎婭;張?jiān)?/a>;常秀君;韓蕙竹;何敏;解安達(dá)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青海大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K49/00
• 分類號(hào): A61K49/00;A61K36/9066;A61P3/10;A61P25/00;A23K50/50;A23K10/30;A23K10/37;A23K10/22;A23K10/26;A23K10/18;A23K20/158;A23K20/163;A23K20/168;A61K
• 代理公司: 重慶萃智邦成專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50231
• 代理人: 舒夢(mèng)來(lái)

1.一種篩選藏藥十八味訶子利尿丸對(duì)2型糖尿病腦病大鼠的腦保護(hù)作用方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1，選取SPF級(jí)SD雄性大鼠，4周齡，體重為80-100g,使用普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用高脂飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素造模，模擬2型糖尿病腦病并發(fā)癥動(dòng)物模型；將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、糖尿病組；其中正常對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng)，糖尿病腦病組給予高脂飼料喂養(yǎng)，喂養(yǎng)持續(xù)14周；

步驟2，將糖尿病腦病組大鼠禁食10-12h,按照STZ總劑量為20mg/kg進(jìn)行尾靜脈注射，正常對(duì)照組給予相同劑量的檸檬酸鈉緩沖液，STZ注射1周后，尾靜脈檢測(cè)大鼠隨機(jī)血糖，血糖≥16.7mmol/L判斷糖尿病造模成功；

步驟3，繼續(xù)飼養(yǎng)6周后通過(guò)Mirros水迷宮實(shí)驗(yàn)篩選2型糖尿病腦病大鼠：前4d為訓(xùn)練，每天下午訓(xùn)練4次，每只大鼠每次訓(xùn)練2min，將大鼠面向池壁隨機(jī)從4個(gè)入水點(diǎn)放入水中，記錄從入水到找到站臺(tái)所用的時(shí)間作為測(cè)試成績(jī)；如果大鼠在2min內(nèi)未找到平臺(tái)，逃避潛伏期計(jì)為2min，并由實(shí)驗(yàn)者將其牽引至平臺(tái)上，停留30s后，放回籠中休息30min之后，開(kāi)始下一次測(cè)試；第5天為測(cè)試期，記錄逃避潛伏期；

步驟4，同正常對(duì)照組比較，逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)，且出現(xiàn)認(rèn)知功能減退的視為2型糖尿病腦病大鼠；將篩選出的2型糖尿病腦病大鼠隨機(jī)分為糖尿病腦病組及藏藥組；

步驟5，開(kāi)始灌胃：灌胃周期為4周，灌胃方法為隔天灌胃，灌胃前禁食不禁水4-6h；藏藥十八味訶子利尿丸灌胃劑量為350mg/kg,溶于3ml生理鹽水；灌胃4周后，再次行Mirros水迷宮實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)步驟同步驟3，記錄逃避潛伏期；

步驟6，處死取大鼠腦部海馬組織；

步驟7，F(xiàn)luo-jade-c染色分析海馬神經(jīng)元退行性變化；Western blots檢測(cè)海馬NF-κB水平；

步驟8，統(tǒng)計(jì)分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種篩選藏藥十八味訶子利尿丸對(duì)2型糖尿病腦病大鼠的腦保護(hù)作用方法，其特征在于：步驟1中的普通飼料組分為：小麥10份，麩子30份，玉米面30份，豆餅20份，魚(yú)粉5份，骨粉2份，酵母2份和食鹽1份。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種篩選藏藥十八味訶子利尿丸對(duì)2型糖尿病腦病大鼠的腦保護(hù)作用方法，其特征在于：步驟2中的高脂飼料組分為：小麥10份，麩子30份，玉米面30份，豆餅20份，魚(yú)粉5份，骨粉2份，酵母2份，食鹽1份，豬油5份、酥油5份、蔗糖10份、膽固醇2.5份、膽酸鈉1份。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種篩選藏藥十八味訶子利尿丸對(duì)2型糖尿病腦病大鼠的腦保護(hù)作用方法，其特征在于：高脂喂養(yǎng)14周，行糖耐量、胰島素耐量試驗(yàn)，建立胰島素抵抗模型后給予小劑量STZ尾靜脈注射。

5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或4任一項(xiàng)所述的一種篩選藏藥十八味訶子利尿丸對(duì)2型糖尿病腦病大鼠的腦保護(hù)作用方法，其特征在于：糖尿病模型成模標(biāo)準(zhǔn)：(1)STZ注射前存在胰島素抵抗；(2)STZ注射1周后，隨機(jī)血糖≥16.7mmol/L。