[發(fā)明專利]一種微環(huán)境敏感型熒光探針的制備方法及其對HSA/BSA檢測的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010037437.8
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號(hào): CN111187247A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張彩紅;亢娜;姚慶佳;王文;張國梅;董川;雙少敏
• 申請（專利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D311/94
• 分類號(hào): C07D311/94;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 太原晉科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 翟沖燕

1.一種微環(huán)境敏感型熒光探針，其特征在于：該熒光探針的分子式為C₃₁H₂₃NO₂，結(jié)構(gòu)式如下：。

2.制備權(quán)利要求1所述的微環(huán)境敏感性熒光探針的方法，其特征在于：具體步驟如下：

（1）在H₂O/THF的混合溶劑中，加入水楊醛，2-環(huán)戊烯-1-酮和咪唑，將混合物在室溫下氮?dú)獗Ｗo(hù)攪拌12~14 h；所得反應(yīng)液用二氯甲烷萃取三次，飽和食鹽水洗滌兩次，無水Na₂SO₄干燥，減壓除去溶劑，并通過柱色譜法純化產(chǎn)物，得到黃色固體化合物1，其結(jié)構(gòu)式為：；其中柱色譜法中所用溶劑為二氯甲烷/石油醚=5 /1，v/v；

（2）化合物1、對二苯氨基苯甲醛和哌啶溶于乙醇中，回流24~26 h，反應(yīng)后混合溶液中加入水，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌兩次，無水Na₂SO₄干燥，減壓除去溶劑，硅膠柱二氯甲烷/甲醇=500/1，v /v分離純化，真空干燥得到紅色固體化合物2即為微環(huán)境敏感性HSA/BSA熒光探針分子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備微環(huán)境敏感性熒光探針的方法，其特征在于：步驟（1）中混合反應(yīng)溶劑中H₂O和THF的體積比為1：1，每1 mmol水楊醛使用溶劑1 mL；每1ml的反應(yīng)混合液加1ml的水，水楊醛：2-環(huán)戊烯-1-酮：咪唑的摩爾比為1：1~1.2：1~1.2。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備微環(huán)境敏感性熒光探針的方法，其特征在于：步驟（2）中化合物1、對二苯氨基苯甲醛、哌啶的摩爾比為1：0.8~1：0.2。

5.權(quán)利要求1所述的微環(huán)境敏感型熒光探針的應(yīng)用，其特征在于：該熒光探針應(yīng)用于甘油和水的混合體系、1，4-二氧六環(huán)和水的混合體系、PBS：DMF = 8 : 2的體系和細(xì)胞組織環(huán)境中HSA和BSA的檢測。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的微環(huán)境敏感型熒光探針的應(yīng)用，其特征在于：在甘油和水的混合體系中：隨著甘油比例的增加，熒光發(fā)射波長藍(lán)移，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)；在1，4-二氧六環(huán)和水的混合體系中，隨著水比例的增加，熒光發(fā)射波長紅移，從576 nm紅移到602 nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的微環(huán)境敏感型熒光探針的應(yīng)用，其特征在于：在PBS : DMF =8 : 2的體系中，將熒光探針與HSA/BSA進(jìn)行反應(yīng)，用熒光強(qiáng)度變化來檢測HSA/BSA的濃度：在未加入HSA/BSA前，探針的熒光信號(hào)弱，發(fā)射波長在610 nm，加入HSA/BSA后，探針熒光信號(hào)增強(qiáng)，發(fā)射波長藍(lán)移至580 nm。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的微環(huán)境敏感型熒光探針的應(yīng)用，其特征在于：在細(xì)胞組織環(huán)境中：檢測人血清蛋白的線性范圍為100-2850 mg/L，檢出限為13.65 mg/L，所述檢測牛血清蛋白的線性范圍為0-900mg/L，檢出限為3.82 mg/L。