[發(fā)明專(zhuān)利]一種疫苗菌株的篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010037421.7
• 申請(qǐng)日: 2020-01-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111197095B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉軍發(fā);邢娟娟;周祺;楊德鴻;麥凱杰;羅翠芬;周慶豐;劉士奇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 溫氏食品集團(tuán)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/689
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州三環(huán)專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;王蘭蘭

本發(fā)明涉及一種篩選方法，具體涉及一種疫苗菌株的篩選方法。本發(fā)明疫苗菌株的篩選方法包括以下步驟：待篩選菌株分離培養(yǎng)；鑒定待篩選菌株是否為所需種類(lèi)的疫苗菌株，如果是，則進(jìn)行后續(xù)操作；鑒定待篩選菌株的血清型；獲取待篩選菌株的基因指紋；建立混合菌株感染模型，以獲得最佳攻毒劑量以及攻毒后最佳分離待篩選菌株的時(shí)間；篩選優(yōu)勝者菌株及最佳優(yōu)勝者；將最佳優(yōu)勝者中的各菌株按照相同的劑量制備滅活苗，進(jìn)行免疫，保護(hù)效果最佳的菌株即為所需的疫苗菌株。本發(fā)明提供了一種高效的疫苗菌株篩選方法，該方法篩選時(shí)間短，易于操作，方便快捷，同時(shí)大幅度降低了成本，能達(dá)到快速篩選的目的。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種篩選方法，具體涉及一種疫苗菌株的篩選方法。

背景技術(shù)

疫苗菌株通常選用保護(hù)效率高，免疫劑量小，容易培養(yǎng)且生產(chǎn)成本低的菌株。在某種細(xì)菌研究背景知識(shí)模糊，毒力因子尚不明確時(shí)，疫苗菌株的篩選方法通常的是，依次對(duì)各個(gè)分離株進(jìn)行毒力的測(cè)定，常用不同劑量的細(xì)菌感染易感動(dòng)物，通過(guò)測(cè)定最小致死量(MLD)和/或半數(shù)致死量(LD50)還可以用最小感染量(MID)和/或半數(shù)感染量(ID50)來(lái)評(píng)價(jià)。這些方法都需要將臨床分離的細(xì)菌一一測(cè)定，工作量較大，比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力，限制了能夠參與篩選的菌株的數(shù)量。

RA感染是發(fā)生在鴨、鵝、火雞等禽類(lèi)的一種接觸傳染性疾病，通常稱(chēng)該病為鴨傳染性漿膜炎，該病呈急性或慢性經(jīng)過(guò)，其特征是纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎和腦膜炎。該菌主要侵害1～8周齡鴨，是長(zhǎng)期以來(lái)是危害國(guó)內(nèi)外養(yǎng)鴨業(yè)的一種主要疫病。由于RA血清型眾多(目前已鑒定出25種血清型)且交叉保護(hù)效果幾乎沒(méi)有，只有同血清型的RA才能有效保護(hù)同血清型的RA感染，而且，即使是同一種血清型的RA，對(duì)同血清型RA的感染能夠提供的保護(hù)力也是不同的，如何從同血清型的RA中來(lái)篩選到最好的菌株，用常用的篩選疫苗菌株方法有諸多局限。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種疫苗菌株的篩選方法，該方法篩選效率高。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：一種疫苗菌株的篩選方法，其包括以下步驟：

(1)待篩選菌株分離培養(yǎng)：從疑似病理組織中獲取含菌病料，進(jìn)行分離培養(yǎng)，得到待篩選菌株；

(2)鑒定待篩選菌株是否為所需種類(lèi)的疫苗菌株，如果是，則進(jìn)行后續(xù)操作；

(3)鑒定待篩選菌株的血清型；

(4)獲取待篩選菌株的基因指紋；

(5)混合菌株感染模型的建立:從步驟(1)所得待篩選菌株中挑取單菌落，進(jìn)行培養(yǎng)后調(diào)整菌株濃度，選取相同血清型的不同待篩選菌株進(jìn)行多個(gè)菌株同樣的濃度混合，每個(gè)組內(nèi)多個(gè)菌株的濃度一樣，按照不同細(xì)菌濃度得到多個(gè)混合組；且同混合組內(nèi)待篩選菌株的基因指紋不同；然后進(jìn)行攻毒，在攻毒后不同時(shí)間梯度分離菌株，以獲得最佳攻毒劑量以及攻毒后最佳分離待篩選菌株的時(shí)間；

(6)從步驟(1)所得待篩選菌株中重新挑取單菌落，按照步驟(5)建立多個(gè)混合組，并篩選出每個(gè)混合組中的1～3個(gè)優(yōu)勝者；

(7)重復(fù)步驟(6)從而獲得多個(gè)優(yōu)勝者，測(cè)序各個(gè)優(yōu)勝者的基因指紋，然后再將多個(gè)優(yōu)勝者組成新的小組，按照步驟(6)的方式繼續(xù)篩選，得到多個(gè)最佳優(yōu)勝者；

(8)將最佳優(yōu)勝者中的各菌株按照相同的劑量制備滅活苗，進(jìn)行免疫和交叉保護(hù)試驗(yàn)，保護(hù)效果最佳的菌株即為所需的疫苗菌株。

本發(fā)明提供了一種簡(jiǎn)捷的篩選疫苗菌株的新方法，該方法通過(guò)混合菌株感染試驗(yàn)動(dòng)物，確定了最佳混合感染劑量及優(yōu)勢(shì)菌種進(jìn)入動(dòng)物腦部的最佳時(shí)間(步驟(5)分離菌株時(shí)可從腦部分離)，然后將從試驗(yàn)動(dòng)物中分離出的優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行驗(yàn)證，篩選出優(yōu)勢(shì)菌種。