[發明專利]一種疫苗菌株的篩選方法

有效

• 申請號: 202010037421.7
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111197095B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 劉軍發;邢娟娟;周祺;楊德鴻;麥凱杰;羅翠芬;周慶豐;劉士奇
• 申請（專利權）人: 溫氏食品集團股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;王蘭蘭

1.一種疫苗菌株的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）待篩選菌株分離培養：從疑似病理組織中獲取含菌病料，進行分離培養，得到待篩選菌株；

（2）鑒定待篩選菌株是否為所需種類的疫苗菌株，如果是，則進行后續操作；

（3）鑒定待篩選菌株的血清型；

（4）獲取待篩選菌株的基因指紋；

（5）混合菌株感染模型的建立:?從步驟（1）所得待篩選菌株中挑取單菌落，進行培養后調整菌株濃度，選取相同血清型的不同待篩選菌株進行多個菌株同樣的濃度混合，每個組內多個菌株的濃度一樣，按照不同細菌濃度得到多個混合組；且同混合組內待篩選菌株的基因指紋不同；然后進行攻毒，在攻毒后不同時間梯度分離菌株，以獲得最佳攻毒劑量以及攻毒后最佳分離待篩選菌株的時間；

（6）從步驟（1）所得待篩選菌株中重新挑取單菌落，按照步驟（5）建立多個混合組，并篩選出每個混合組中的1~3個優勝者；

（7）重復步驟（6）從而獲得多個優勝者，測序各個優勝者的基因指紋，然后再將多個優勝者組成新的小組，按照步驟（6)的方式繼續篩選，得到多個最佳優勝者；

(8)?將最佳優勝者中的各菌株按照相同的劑量制備滅活苗，進行免疫和交叉保護試驗，保護效果最佳的菌株即為所需的疫苗菌株；

所述步驟（4）中，獲取待篩選菌株的基因指紋的方法包括以下步驟：

（4a）基因組提取：從步驟（1）所得待篩選菌株中挑取單菌落，培養后提取基因組；

（4b）采用PCR擴增步驟（4a）所得基因組的高變異片段，通過電泳檢測PCR擴增產物，并進行膠回收；

（4c）進行測序分析，然后對比測序結果，得到待篩選菌株的基因指紋；

所述疫苗菌株為鴨疫里默氏桿菌，所述步驟（4b）中的高變異片段為CRISPR?spacer序列；

所述步驟（4b）中，PCR擴增的試劑包括如SEQ?ID?NO:?1和SEQ?ID?NO:?2所示的引物。

2.如權利要求1所述的疫苗菌株的篩選方法，其特征在于，所述步驟（7）中，最佳優勝者為3-5株待篩選菌株。

3.如權利要求1~2任一項所述的疫苗菌株的篩選方法，其特征在于，所述疫苗菌株用于鴨。

4.如權利要求1所述的疫苗菌株的篩選方法，其特征在于，所述步驟（1）中，疑似病理組織為肝臟或鴨腦。

5.如權利要求1所述的疫苗菌株的篩選方法，其特征在于，所述步驟（4b）中，PCR擴增的試劑還包括2×Taq?PCR?Mix、雙蒸水、陰性對照品和陽性對照品。

6.如權利要求5所述的疫苗菌株的篩選方法，其特征在于，所述陰性對照品為雙蒸水，所述陽性對照品為鴨疫里默氏桿菌基因組。