[發明專利]犬新孢子蟲特異PCR檢測試劑盒及制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010036895.X
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111197100B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 劉群;楊聰山;劉晶;許建海
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6893
• 分類號: C12Q1/6893;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京興智翔達知識產權代理有限公司 11768
• 代理人: 郭衛芹

本發明公開了一種犬新孢子蟲特異PCR檢測試劑盒及制備方法和應用，其中犬新孢子蟲的特異基因序列為SEQ ID NO.1，該特異基因序列在犬新孢子蟲基因組中具有五個拷貝，進一步設計了該特異基因序列的擴增引物并構建犬新孢子蟲PCR檢測試劑盒，擬應用于動物新孢子蟲感染的臨床檢測和篩查，可準確、快速診斷犬新孢子蟲感染所致的母畜流產病原以及對動物群體新孢子蟲感染的調查。

技術領域

本發明是關于動物檢驗檢疫技術領域，特別是關于一種犬新孢子蟲特異PCR檢測試劑盒及制備方法和應用。

背景技術

犬新孢子蟲(Neospora caninum)隸屬于頂復亞門的胞內寄生原蟲，可以感染多種動物，能夠引起牛、犬等多種動物的神經肌肉系統功能障礙和妊娠動物繁殖障礙。為有效檢測犬新孢子蟲感染，研究人員已建立了多種血清學和免疫學檢測方法，包括間接免疫熒光實驗(IFAT)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)以及改良凝集試驗(NAT)等，其中ELISA在檢測犬新孢子蟲感染最為廣泛，但其對于早期感染和5月齡內犢牛感染時效果不佳。PCR擴增是目前運用最普遍的分子生物學工具，以及廣泛用于多種疾病和感染的診斷。目前，已經有用于犬新孢子蟲診斷的PCR方法，但在低豐度樣本中存在靈敏度低、特異性差的特點。因此篩選出犬新孢子蟲的特異基因并建立高靈敏度和高特異性的PCR檢測方法對犬新孢子蟲感染的診斷十分必要。國內外對于犬新孢子蟲病的檢疫診斷還相對滯后，對該病的檢測遠不能滿足實際需要。因此，建立簡便易行、快速、靈敏、特異的分子生物學檢測方法勢在必行。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

本發明的目的在于提供一種犬新孢子蟲的特異基因序列，該特異基因序列在犬新孢子蟲基因組中具有五個拷貝，從而更有利于根據犬新孢子蟲基因組序列特征設計特異擴增引物，可準確、快速診斷犬新孢子蟲感染所致的母畜流產病原以及對動物群體新孢子蟲感染的調查。

為實現上述目的，本發明提供了犬新孢子蟲的特異基因序列，所述特異基因序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明還提供了一對擴增引物，所述擴增引物用于擴增上述犬新孢子蟲的特異基因序列，所述擴增引物具有以下序列：上游引物F：5’-CGCACAAGAAACCGAGGAA-3’(SEQ IDNO.2)，下游引物R：5’-GAAGGCGAGAAGCCCAAGT-3’(SEQ ID NO.3)。

本發明還提供了一種犬新孢子蟲特異PCR檢測試劑盒，包括上述擴增引物。

本發明還提供了一種犬新孢子蟲特異PCR檢測試劑盒，包括以下試劑：10×PCR反應液、上述擴增引物、陽性對照DNA、陰性對照、和ddH₂O。

在一優選的實施方式中，所述陽性對照DNA為犬新孢子蟲基因組DNA。

在一優選的實施方式中，所述陰性對照為dH₂O。