[發(fā)明專利]一種高效體外擴增培養(yǎng)具有強殺傷力的自然殺傷性細胞的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010036824.X | 申請日： | 2020-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN111349601A | 公開（公告）日： | 2020-06-30 |
| 發(fā)明（設計）人： | 汪曉敏;袁衛(wèi)平;楊爽;袁勝男;初雅婧 | 申請（專利權）人： | 中國醫(yī)學科學院血液病醫(yī)院（中國醫(yī)學科學院血液學研究所） |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 天津市尚儀知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 12217 | 代理人： | 王山 |
| 地址： | 300041 *** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高效 體外 擴增 培養(yǎng) 具有 殺傷力 自然 殺傷性 細胞 方法 | ||
1.一種高效體外擴增培養(yǎng)具有強殺傷力的自然殺傷性細胞的方法，其特征在于：包括以下步驟：
a.載體構建：構建過表達4-1BBL和IL-15的載體；
b.病毒包裝：采用步驟a中構建的質(zhì)粒包裝慢病毒，檢測病毒滴度；
c.K562細胞的感染與制備：采用步驟b中的病毒對K562細胞進行感染，檢測4-1BBL表達效率和IL-15表達效率；
d.滅活K562細胞：采用X-ray照射K562細胞；
e.收集單個核細胞：抽取健康人外周血，利用梯度離心方法富集外周血單個核細胞；
f.預擴增自然殺傷性細胞：利用NK細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)外周血單個核細胞，獲得超過50%的NK細胞；
g.采用步驟d中的K562細胞，體外刺激步驟f中的NK細胞活化和擴增；
h.利用CD56磁珠富集NK細胞。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種高效體外擴增培養(yǎng)具有強殺傷力的自然殺傷性細胞的方法，其特征在于：步驟a中，表達4-1BBL的載體包括4-1BBL基因的CDS編碼區(qū)，其中包含4-1BBL基因信號肽；表達IL-15的載體包括IL-15基因的CDS編碼區(qū)，其中包含IL-15基因信號肽。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種高效體外擴增培養(yǎng)具有強殺傷力的自然殺傷性細胞的方法，其特征在于：步驟d中，K562細胞經(jīng)過銫照射源半致死劑量照射，使K562細胞喪失增殖能力；所述K562細胞包括K562細胞、過表達4-1BBL的K562細胞和過表達IL-15的K562細胞。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種高效體外擴增培養(yǎng)具有強殺傷力的自然殺傷性細胞的方法，其特征在于：步驟e中抽取健康人外周血10ml，10ml外周血為起始采血量。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種高效體外擴增培養(yǎng)具有強殺傷力的自然殺傷性細胞的方法，其特征在于：步驟g中，外周血單個核細胞與滅活的過表達4-1BBL的K562細胞和/或滅活的過表達IL-15的K562細胞共培養(yǎng)。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種高效體外擴增培養(yǎng)具有強殺傷力的自然殺傷性細胞的方法，其特征在于：步驟h中，獲得的NK細胞同時具備CD45和CD56；最終獲得的細胞群體中CD56+細胞含量大于98%。
7.根據(jù)權利要求1所述的一種高效體外擴增培養(yǎng)具有強殺傷力的自然殺傷性細胞的方法，其特征在于：步驟h中，獲得的NK細胞具有強烈的殺傷腫瘤細胞能力。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中國醫(yī)學科學院血液病醫(yī)院（中國醫(yī)學科學院血液學研究所），未經(jīng)中國醫(yī)學科學院血液病醫(yī)院（中國醫(yī)學科學院血液學研究所）許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權和技術合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202010036824.X/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
