[發(fā)明專利]NK細胞擴增方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010036412.6 | 申請日： | 2020-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN111154721B | 公開（公告）日： | 2023-10-17 |
| 發(fā)明（設計）人： | 賀光銳;苑英姿;王慧琴 | 申請（專利權）人： | 深圳格泰賽爾生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京云嘉湃富知識產(chǎn)權代理有限公司 11678 | 代理人： | 陳順華 |
| 地址： | 518051 廣東省深圳市南山區(qū)蛇口*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | nk 細胞 擴增 方法 | ||
1.一種NK細胞擴增方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)分離獲得單個核細胞；
(2)加入無血清培養(yǎng)基和活化因子，培養(yǎng)；
其中，所述活化因子為IL-2和CD3單抗。
2.根據(jù)權利要求1所述的NK細胞擴增方法，其特征在于，所述IL-2的終濃度為300～800IU/mL，所述CD3單抗的終濃度為4～20ng/mL。
3.根據(jù)權利要求1所述的NK細胞擴增方法，其特征在于，基于所述無血清培養(yǎng)基的總體積，所述單個核細胞的細胞密度為0.5×106～1.0×106/mL。
4.根據(jù)權利要求1所述的NK細胞擴增方法，其特征在于，培養(yǎng)第5天全換液。
5.根據(jù)權利要求4所述的NK細胞擴增方法，其特征在于，全換液后，培養(yǎng)基內(nèi)所述IL-2的終濃度為300～800IU/mL。
6.根據(jù)權利要求4所述的NK細胞擴增方法，其特征在于，所述全換液包括以下步驟：
在第5天離心、去上清后，加入緩沖液混勻，離心，保留沉淀；
將所述沉淀重懸于所述無血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
7.根據(jù)權利要求6所述的NK細胞擴增方法，其特征在于，所述全換液后，每隔1～2天補加所述無血清培養(yǎng)基和終濃度為300～800IU/ml的所述IL-2。
8.根據(jù)權利要求1至7任一項所述的NK細胞擴增方法，其特征在于，所述無血清培養(yǎng)基中包括1～5％體積比的自體血漿。
9.根據(jù)權利要求1至7任一項所述的NK細胞擴增方法，其特征在于，所述無血清培養(yǎng)基選自：SCGM、X-VIVO15、AIM-V、KBM581。
10.根據(jù)權利要求1至7任一項所述的NK細胞擴增方法，其特征在于，培養(yǎng)第14～21天收獲NK細胞。
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