[發明專利]產脂肪酶的近平滑假絲酵母菌株的篩選方法、菌株及其制備得到的脂肪酶

在審

• 申請號: 202010034954.X
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111154663A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 楊宇童
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N9/20;C12R1/72
• 代理公司: 北京超成律師事務所 11646
• 代理人: 李雪嬌

本發明提供了一種產脂肪酶的近平滑假絲酵母菌株的篩選方法、菌株及其制備得到的脂肪酶，涉及生物工程技術領域，該篩選方法采用含有近平滑假絲酵母菌株的土壤作為初始篩選物，先通過富集培養液對土壤中的菌株進行富集，隨后采用乳化平板培養基對菌株進行篩選純化得到近平滑假絲酵母菌株，該方法工藝簡單，篩選提取工藝可控，可以快速有效的提取純化得到產脂肪酶的近平滑假絲酵母菌株。本發明同時還對篩選得到的產脂肪酶的近平滑假絲酵母菌株進行了形態學、生理生化及分子生物學鑒定，并對該菌株發酵得到的脂肪酶進行了酶活檢測。本發明對篩選具有新特性的活力高、產量高及成本低的脂肪酶菌株，同時開發脂肪酶新的應用領域具有十分重要的意義。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其是涉及一種產脂肪酶的近平滑假絲酵母菌株的篩選方法、菌株及其制備得到的脂肪酶。

背景技術

脂肪酶全稱為三酰基甘油酰基水解酶(E.C.3.1.1.3)，是一類水溶性酶。能夠將三脂酰甘油酯逐步水解為甘油和脂肪酸。同時能夠水解多種不溶性酯類物質，即除了天然作用底物三脂酰甘油酯外，還能夠水解磷脂類、膽固醇酯類等不溶性酯類。在非水相界面脂肪酶還能催化合成發應，如酯化反應、醇解和酸解反應、酯交換等。現在脂肪酶已被廣泛用于食品工業、洗滌劑行業、生物制藥、動物飼料等行業，并已經成為在生物技術和生物化學領域中應用最廣泛的酶類之一。

脂肪酶的來源廣泛，在動植物體內均能發現脂肪酶。在1871年已經有植物種子脂肪酶的報道。而一般動物體內的脂肪酶含量較少，活性不高。微生物脂肪酶到二十世紀初才被微生物學家Eijkmann從幾株細菌中發現。由于其相比動植物脂肪酶具有更強的酸堿耐受性和溫度適應性，且易于分離提純、便于基因操作、發酵周期短等優勢，現今用于工業生產的脂肪酶主要來源便是微生物發酵。微生物脂肪酶種類豐富，早期報道約有2％的微生物能夠合成脂肪酶，其中細菌有28個屬，酵母菌有10個屬，其他真菌有23個屬，放線菌有4個屬，總共65個屬。霉菌、酵母菌、細菌都是比較常見的高產脂肪酶微生物，其中曲霉菌屬、假絲酵母菌屬和假單胞菌屬都是重要的脂肪酶來源。而在工業生產中應用最為廣泛的則是褶皺假絲酵母。目前還有許多種屬的產脂肪酶微生物正陸續被發現，如鉤端螺旋體、金黃色葡萄球菌等。

而目前國內外仍未有關近平滑假絲酵母菌(C.parapsilokis)能夠有效降解脂肪的相關報道。近平滑假絲酵母菌，真菌界，屬于假絲酵母菌屬，可侵犯皮膚、粘膜和內臟，表現為急性、亞急性或慢性炎癥，大多為繼發性感染。對于近平滑假絲酵母菌的相關報道以及研究主要是婦產科臨床感染、致病性等。但是對于其所產酶類研究甚少，特別是目前應用廣泛的脂肪酶。

有鑒于此，提供一種產脂肪酶的近平滑假絲酵母菌株以及其篩選方法，和利用該菌株發酵生產脂肪酶的方法，具有非常現實的意義。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種產脂肪酶的近平滑假絲酵母菌株的篩選方法、菌株及其制備得到的脂肪酶，并對提取得到的菌株進行形態學、生理生化及分子生物學鑒定，同時對該菌株制備得到的脂肪酶進行酶活檢測。

本發明提供的一種產脂肪酶的近平滑假絲酵母菌株的篩選方法，所述方法包括以下步驟：

首先采集含有近平滑假絲酵母菌株的土壤并接種到富集培養液中對進行菌株富集培養，然后將富集得到的培養液涂布于乳化平板培養基中進行篩選培養，隨后將篩選培養后的菌落進行純化得到產脂肪酶的近平滑假絲酵母菌株。

進一步的，所述富集培養液主要由碳酸銨、硝酸銨、七水硫酸鎂和磷酸氫二鉀組成；

優選的，所述每L富集培養液中包括硫酸銨0.14～0.16g、硝酸銨0.08～0.1g、七水硫酸鎂0.04～0.06g、磷酸氫二鉀0.01～0.02g和橄欖油0.01～0.03L，所述富集培養液的pH為6～8。

更優選的，所述富集培養液的pH為7。