[發明專利]一種磷酸化卵白蛋白及其對大豆苷元功能特性改善的研究方法

有效

• 申請號: 202010033873.8
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111234006B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 李燦鵬
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C07K14/77
• 分類號: C07K14/77;C07K1/113;G01N21/64
• 代理公司: 成都市鼎宏恒業知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51248
• 代理人: 富麗娟

本發明涉及生物領域，具體涉及一種磷酸化卵白蛋白及其對大豆苷元功能特性改善的研究方法。包括以下步驟：S1：將含卵白蛋白的溶液與含植酸的溶液混合并調節pH至4后定容，經冷凍干燥后得到混合溶液，對所述混合溶液加熱進行磷酸化反應，得到磷酸化卵白蛋白，并提供了磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，以提高Dai的溶解度，并獲得該現象機理的研究方法。

技術領域

本發明涉及生物領域，具體涉及一種磷酸化卵白蛋白及其對大豆苷元功能特性改善的研究方法。

背景技術

大豆黃酮(Daizezein，Dai)是一種富含大豆的異黃酮，分子量為254.24D.A。它具有抗氧化，抗癌，植物雌激素活性，抗動脈粥樣硬化和抗骨質疏松癥。然而，差的溶解度，低的油/水分配系數以及高的新陳代謝強烈地限制了其生物利用度。一種提高Dai的溶解度和生物利用度的常規方法是使用基于脂質的載體，包括納米結構脂質載體，固體脂質納米顆粒和納米乳液。然而，由于疏水性化合物的溶解度低和結晶度高，在儲存過程中觀察到藥物從乳液的油相向水相連續轉移，導致明顯的沉淀或結晶。

本申請意在用一種磷酸化修飾的卵白蛋白作為潛在的疏水性藥物結晶抑制劑，以提高Dai的溶解度，并提供該蛋白與配體之間的相互作用機理的研究方法。

發明內容

本發明的目的在于提供磷酸化卵白蛋白及其對大豆苷元功能特性改善的研究方法，以提高Dai的溶解度，并獲得該現象機理的研究方法。

為解決上述的技術問題，本發明采用以下技術方案：

一種磷酸化卵白蛋白的制備方法：包括以下步驟：S1：將含卵白蛋白的溶液與含植酸的溶液混合并調節pH至4后定容，經冷凍干燥后得到混合產物，對所述混合產物加熱進行磷酸化反應，得到磷酸化卵白蛋白。

通過將卵白蛋白與植酸在加熱條件下進行磷酸化反應，反應柔和，蛋白不變性，副反應少，產物純度高，反應易控制，所用磷酸化試劑為植酸，無毒可食用，即使殘留也不影響正常食用。

一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，包括以下步驟：

S1：磷酸化卵白蛋白的制備；將含卵白蛋白的溶液與含植酸的溶液混合并調節pH至4后定容，經冷凍干燥后得到混合產物，對所述混合產物加熱進行磷酸化反應，得到磷酸化卵白蛋白；

S2：復合物的制備：將磷酸化卵白蛋白配置為蛋白溶液，在蛋白溶液中加入大豆苷元溶液，經攪拌至大豆苷元完全溶解，再經冷凍干燥后得到復合物；

S3：表征研究。

作為優選，所述的S1步驟中，含卵白蛋白的溶液中，卵白蛋白質量分數為1％，所述含植酸的溶液中，植酸濃度為0.47～0.67mol/l。

作為優選，所述的S1步驟中，對所述混合產物加熱進行磷酸化反應后，將反應物在超純水中室溫常壓下透析2天，再將透析液冷凍干燥得到磷酸化卵白蛋白，提高純度。

作為優選，所述的冷凍干燥溫度為-50℃、時間為24h。

作為優選，所述的S1步驟中，對所述混合產物加熱進行磷酸化反應，溫度為90℃，反應時間為3天。

作為優選，所述的表征研究為熒光光譜測定，具體為將S1步驟中得到的磷酸化卵白蛋白溶解于水中，配制磷酸化卵白蛋白溶液，取大豆苷元加入至乙醇溶液中，配制大豆苷元溶液，將所述磷酸化卵白蛋白溶液加入大豆苷元溶液后進行水浴孵育，并設置對照組，再采用不同波長的激光進行熒光光譜測定。

作為優選，熒光光譜測定后，結合小分子與大分子的結合參數通過以下公式計算，分析結合能力：log[(F0-F)/F]＝logKa+nlog[Q],其中F0和F分別是淬滅劑(Dai)加入前后的熒光強度，Ka和n分別是結合常數和結合位點的數目，[Q]是淬滅劑的濃度；