[發明專利]一種磷酸化卵白蛋白及其對大豆苷元功能特性改善的研究方法

有效

• 申請號: 202010033873.8
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111234006B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 李燦鵬
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C07K14/77
• 分類號: C07K14/77;C07K1/113;G01N21/64
• 代理公司: 成都市鼎宏恒業知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51248
• 代理人: 富麗娟

1.一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1：磷酸化卵白蛋白的制備；將含卵白蛋白的溶液與含植酸的溶液混合并調節pH至4后定容，經冷凍干燥后得到混合產物，對所述混合產物加熱進行磷酸化反應，得到磷酸化卵白蛋白；

S2：復合物的制備：將磷酸化卵白蛋白配置為蛋白溶液，在蛋白溶液中加入大豆苷元溶液，經攪拌至大豆苷元完全溶解，再經冷凍干燥后得到復合物；

S3：表征研究。

2.根據權利要求1所述的一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，其特征在于：所述的S1步驟中，含卵白蛋白的溶液中，卵白蛋白質量分數為1％，所述含植酸的溶液中，植酸濃度為0.47～0.67mol/l。

3.根據權利要求1所述的一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，其特征在于：所述的S1步驟中，對所述混合產物加熱進行磷酸化反應后，將反應物在超純水中室溫常壓下透析2天，再將透析液冷凍干燥得到磷酸化卵白蛋白。

4.根據權利要求1或3所述的一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，其特征在于：所述步驟S1以及所述步驟S2中的所述冷凍干燥溫度均為-50℃、時間為24h。

5.根據權利要求1所述的一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，其特征在于：所述的S1步驟中，對所述混合產物加熱進行磷酸化反應，溫度為90℃，反應時間為3天。

6.根據權利要求1所述的一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，其特征在于：對S1步驟中得到的磷酸化卵白蛋白進行熒光光譜測定，具體為將S1步驟中得到的磷酸化卵白蛋白溶解于水中，配制磷酸化卵白蛋白溶液，取大豆苷元加入至乙醇溶液中，配制大豆苷元溶液，將所述磷酸化卵白蛋白溶液加入大豆苷元溶液后進行水浴孵育，并設置對照組，再采用不同波長的激光進行熒光光譜測定。

7.根據權利要求6所述的一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，其特征在于：熒光光譜測定后，結合小分子與大分子的結合參數通過以下公式計算，分析結合能力：log[(F0-F)/F]＝logKa+nlog[Q],其中F0和F分別是淬滅劑加入前后的熒光強度，所述淬滅劑為Dai，Ka和n分別是結合常數和結合位點的數目，[Q]是淬滅劑的濃度；

通過以下公式計算，分析熒光猝滅機理：F 0/F＝1+K SV Q＝1+kqτ0Q，F 0和F分別是淬滅劑(Dai)加入前后的熒光強度，K SV是Sterne-Volmer淬滅常數，[Q]是淬滅劑的濃度，Kq是雙分子猝滅常數，τ 0是生物分子的平均壽命。

8.據權利要求1所述的一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，其特征在于：對S1步驟中得到的磷酸化卵白蛋白進行同步熒光光譜測定，具體為將S1步驟中得到的磷酸化卵白蛋白溶解于水中，配制磷酸化卵白蛋白溶液，取大豆苷元加入至乙醇溶液中，配制大豆苷元溶液，將所述磷酸化卵白蛋白溶液加入大豆苷元溶液后進行水浴孵育，并設置對照組，再采用同步熒光光譜測定。

9.據權利要求1所述的一種磷酸化卵白蛋白對大豆苷元功能特性改善的研究方法，其特征在于：對S1步驟中得到的磷酸化卵白蛋白進行結晶抑制現象的測定，具體為配制大豆苷元溶液，將S1步驟中得到的磷酸化卵白蛋白按照不同的配比分別加入至大豆苷元溶液中，觀察結晶現象，并測定透光率以及上清液大豆苷元濃度的含量。