[發明專利]一種改良的微載體活細胞熒光染色方法在審
| 申請號： | 202010033848.X | 申請日： | 2020-01-13 |
| 公開（公告）號： | CN111175112A | 公開（公告）日： | 2020-05-19 |
| 發明（設計）人： | 陳錦陽;李靜靜;劉軍權 | 申請（專利權）人： | 浙江衛未生物醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N1/30 | 分類號： | G01N1/30 |
| 代理公司： | 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624 | 代理人： | 郭智 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 改良 載體 細胞 熒光 染色 方法 | ||
1.一種新的微載體活細胞熒光染色方法，主要包括以下步驟：
(1)取2ml左右貼壁狀態良好的微載體細胞懸液，去掉培養基，用無菌DPBS輕輕清洗1～2次，棄掉DPBS洗滌液；
(2)配制活細胞熒光染色液：取10ul Caclein-AM原液加入到1ml無血清培養基中，混合均勻；
(3)向洗滌好的微載體中加入剛剛制備好的活細胞熒光染色液進行染色，室溫孵育10～30min；
(4)染色完成后，加入1ml抗熒光衰減劑DABCO；
(5)將孵育好的微載體放在熒光顯微鏡或激光掃描共聚焦顯微鏡及其配套的活細胞工作站下進行觀察拍照。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的微載體為國產或者進口的球形或片狀等其他類型的微載體材料，專門用于貼壁細胞的培養。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中細胞清洗液為DPBS，也可以為PBS、生理鹽水或無血清培養基。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的細胞為原代或傳代培養的干細胞或其他種類的細胞。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的無血清培養基為培養該細胞的基礎培養基(不含血清)。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中的Caclein-AM原液為濃度為4mM Caclein-AM的DMSO溶液。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(3)中的染色液必須是現配現用，因為Caclein-AM對濕度非常敏感，Caclein-AM水溶液不穩定。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(3)中的染色液的孵育時間為10～30min。
9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(4)中的抗熒光衰減劑為DABCO即1,4-二偶氮雙環[2,2,2]-辛烷，其質量濃度通常為0～1.0％。
10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，該種活細胞熒光染色方法適用于但不僅限于微載體培養的貼壁細胞。
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