[發明專利]一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備及使用方法

有效

• 申請號: 202010033287.3
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111198222B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 李燦鵬
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48;G01N33/574
• 代理公司: 成都市鼎宏恒業知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51248
• 代理人: 富麗娟

本發明涉及生物領域，具體涉及一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備及使用方法。本發明通過在電極表面依次修飾上金納米粒子負載的具有較好導電性的聚多巴胺和氮化硼復合物(Au@PDA@BCN)和對信號分子亞甲基藍(MB)具有優良富集作用的金鉑納米粒子修飾的二氧化錳共價有機框架復合材料(AuPt@MnO2@TFPB?COF)；通過兩種材料實現對電化學信號的放大效果，所構建的使用肽和抗體的夾心型檢測前列腺特異性抗原的電化學免疫傳感器實現了精確定量檢測前列腺特異性抗原的目的。

技術領域

本發明涉及生物領域，具體涉及一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備及使用方法。

背景技術

前列腺癌是男性癌癥的主要組成之一，在美國，也有成千上萬的男性死于前列腺癌，因此前列腺癌也受到了各界的廣泛關注。到目前為止，前列腺癌并沒有徹底根治的方法，而解決這一問題的最佳方法就是先前的診斷。前列腺特異性抗原，是一種與血清中的前列腺癌相關的重要蛋白質，也已經被證實是前列腺癌的最有效的標志物。當前列腺特異性抗原的濃度高于4.0ng/mL時(人體中前列腺特異性抗原的國際認可水平)，患前列腺癌的風險將會大大增加。而且，前列腺特異性抗原的值還顯示了患者對前列腺切除手術的反應。術后患者的前列腺特異性抗原的濃度超過0.5ng/mL時也會增大患癌風險。因此，前列腺特異性抗原的超靈敏檢測對于前列腺癌的早期診斷和檢測治療至關重要。

現在常用的檢測前列腺特異性抗原的方法，例如化學發光法，熒光法和質譜免疫測定法，通常都需要配備精密分析儀器的大型實驗室，需要復雜的操作和大量的等待時間。盡管酶聯免疫吸附測定能夠在2小時內同時檢測96個樣品，但基于酶的生物傳感器很容易受到環境、生物酶固定和純化程序復雜以及成本高等因素的限制，因此，開發出一種具有簡單，快速，便宜和超靈敏性的卓越傳感器就顯得尤其重要。

而現在常用的夾心型電化學免疫傳感器都是基于抗體和抗原的特異性結合，但是抗體的生產周期長，價格昂貴。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備及使用方法，以解決現有的對于前列腺特異性抗原的檢測成本高、靈敏度低、穩定性差等問題。

為解決上述的技術問題，本發明采用以下技術方案：

一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備方法：包括以下步驟：

(1)玻碳電極的處理：將玻碳電極清洗干凈；

(2)將金納米粒子負載聚多巴胺和氮化硼復合物的納米材料分散液滴加至步驟(1)中清洗干凈的玻碳電極表面，晾干；

(3)將前列腺特異性抗體滴加到步驟(2)處理好的玻碳電極表面，進行孵育，孵育完成后用磷酸鹽緩沖液清洗電極表面，晾干；

(4)將牛血清蛋白溶液滴加到步驟(3)處理好的玻碳電極表面，進行孵育，孵育完成后用磷酸鹽緩沖液清洗電極表面，晾干；

(5)將前列腺特異性抗原溶液滴加到步驟(4)處理好的電極表面，進行孵育，孵育完成后用磷酸鹽緩沖液清洗電極表面，晾干；

(6)將肽的生物共軛探針滴加到步驟(5)處理好的電極表面，進行孵育，孵育完成后用磷酸鹽緩沖液清洗電極表面，晾干，得到檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器。

作為優選，所述的步驟(1)中，玻碳電極的處理具體為：將玻碳電極用的Al₂O₃拋光粉拋光，然后分別用硝酸溶液、乙醇溶液、超純水超聲清洗。

作為優選，所述的步驟(2)金納米粒子負載聚多巴胺和氮化硼復合物的納米材料分散液的制備方法具體包括以下步驟：