[發明專利]一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備及使用方法

有效

• 申請號: 202010033287.3
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111198222B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 李燦鵬
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48;G01N33/574
• 代理公司: 成都市鼎宏恒業知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51248
• 代理人: 富麗娟

1.一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備方法：其特征在于：包括以下步驟：

（1）玻碳電極的處理：將玻碳電極清洗干凈；

（2）將金納米粒子負載聚多巴胺和氮化硼復合物的納米材料分散液滴加至步驟(1)中清洗干凈的玻碳電極表面，晾干；

（3）將前列腺特異性抗體滴加到步驟(2)處理好的玻碳電極表面，進行孵育，孵育完成后用磷酸鹽緩沖液清洗電極表面，晾干；

（4）將牛血清蛋白溶液滴加到步驟(3)處理好的玻碳電極表面，進行孵育，孵育完成后用磷酸鹽緩沖液清洗電極表面，晾干；

（5）將前列腺特異性抗原溶液滴加到步驟(4)處理好的電極表面，進行孵育，孵育完成后用磷酸鹽緩沖液清洗電極表面，晾干；

（6）將肽的生物共軛探針滴加到步驟(5)處理好的電極表面，進行孵育，孵育完成后用磷酸鹽緩沖液清洗電極表面，晾干，得到檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器；

所述的步驟（2）金納米粒子負載聚多巴胺和氮化硼復合物的納米材料分散液的制備方法具體包括以下步驟：

S1：在去離子水中加入HAuCl4溶液，在110℃條件下加熱，然后加入檸檬酸鈉溶液，在110℃條件下沸騰回流直至溶液變為酒紅色，冷卻后得到金納米粒子分散液；

S2：取4-吡啶基硼酸置于管式爐中，在氮氣流的保護下將管式爐加熱至800℃煅燒得到黑色的氮化硼；

S3：按照質量份數比為1:2的比例分別稱取步驟S2制備好的氮化硼和多巴胺，將兩者分散在pH=8.5的Tris鹽酸緩沖液中，超聲處理；然后在攪拌條件下緩慢加入步驟S1制備好的金納米粒子分散液，攪拌至溶液變為黑色，經離心處理并洗滌，最終分散在去離子水中得到金納米粒子負載聚多巴胺和氮化硼復合物的納米材料分散液。

2.根據權利要求1所述的一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于：所述的步驟（1）中，玻碳電極的處理具體為：將玻碳電極用的Al2O3拋光粉拋光，然后分別用硝酸溶液、乙醇溶液、超純水超聲清洗。

3.根據權利要求1所述的一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于：所述的步驟（3）中，孵育條件為4℃條件下孵育12h。

4.根據權利要求1所述的一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于：所述的步驟（5）中，前列腺特異性抗原溶液的濃度為0.00005-10ng/mL。

5.根據權利要求1所述的一種檢測前列腺特異性抗原的夾心型電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于：所述的步驟（6）中，肽的生物共軛探針的制備方法具體包括以下步驟：

N1：在燒瓶中加入1,2,4,5-四(4-甲酰基苯基)苯、對苯二胺，然后再加入體積比為1:1的均三甲苯和環氧己烷的混合溶劑，密封燒瓶并在超聲處理，然后加入乙酸溶液，該混合物通過三次冷凍-融化循環脫氣后加入氬氣密封，并將燒瓶進行油浴，之后冷卻過濾，用四氫呋喃和丙酮洗滌之后真空冷凍干燥得到淺黃色的粉末TFPB-COF；

N2：取步驟N1制備好的TFPB-COF于燒杯中，再加入HClO4溶液，加入去離子水超聲混合，然后在30℃水浴中將KMnO4加入溶液中，攪拌后再超聲處理，最后濾出懸浮液并在60℃條件下干燥得到黑色粉末MnO2@TFPB-COF；

N3：取步驟N2制備好的MnO2@TFPB-COF于燒瓶中，加入無水乙醇超聲處理，再緩慢加入HAuCl4乙醇溶液和H2PtCl6乙醇溶液并超聲處理，然后在冰浴中加入NaBH4乙醇溶液并超聲處理，然后離心處理并用去離子水洗滌，最后重懸于pH=7.0的PBS中得到AuPt@MnO2@TFPB-COF分散液；

N4：將亞甲基藍溶液滴加到步驟N3制備好的AuPt@MnO2@TFPB-COF分散液中并攪拌，然后離心處理并用pH=7.0的PBS洗滌，最后分散在pH=7.0的PBS中得到MB@MnO2@TFPB-COF分散液；

N5：將前列腺特異性抗原親和肽加入步驟N4制備的MB@MnO2@TFPB-COF分散液中，經攪拌后，離心處理并用pH=7.0的PBS洗滌，得到肽的生物共軛探針。