[發明專利]酰胺酶突變體及其在催化合成2-氯煙酸中的應用

有效

• 申請號: 202010032055.6
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111154746B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 鄭仁朝;劉長豐;吳哲明;鄭裕國
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N9/80
• 分類號: C12N9/80;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/12;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 韓聰

1.一種酰胺酶突變體，其特征在于，所述酰胺酶突變體由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第378位、402位或403位進行單位點突變或多位點突變獲得，

其中，單位點突變的酰胺酶突變體為SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第378位丙氨酸突變成纈氨酸或蘇氨酸、或第402位的纈氨酸突變成亮氨酸、或第403位的亮氨酸突變成纈氨酸或蘇氨酸；

多位點突變的酰胺酶突變體為SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第378位的丙氨酸突變成蘇氨酸且第403位的亮氨酸突變為纈氨酸、或第378位的丙氨酸突變成蘇氨酸且第402位的纈氨酸突變為亮氨酸、或第378位的丙氨酸突變成纈氨酸且第402位的纈氨酸突變為亮氨酸、或第378位的丙氨酸突變成纈氨酸且第403位的亮氨酸突變為纈氨酸、或第378位的丙氨酸突變成纈氨酸且第402位的纈氨酸突變為亮氨酸且第403位的亮氨酸突變為纈氨酸。

2.一種編碼如權利要求1所述的酰胺酶突變體的編碼基因。

3.一種包含如權利要求2所述的編碼基因的重組基因工程菌。

4.如權利要求1所述的酰胺酶突變體在催化2-氯煙酰胺制備2-氯煙酸中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，包括：以包含酰胺酶突變體編碼基因的工程菌經發酵培養后獲得的濕菌體或者濕菌體破碎后提取的酶作為生物催化劑，以2-氯煙酰胺為底物，以pH為7.5～8.5的緩沖液為反應介質，30～60℃、150～500r/min條件下進行轉化反應，反應結束后取反應液分離純化，獲得2-氯煙酸。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，反應體系中，底物的初始濃度為50～300mM，每隔10～60min進行補料至終濃度50～200mM。

7.如權利要求5所述的應用，其特征在于，反應體系中，催化劑的用量以菌體干重計為0.25～2.5g/L。

8.如權利要求5所述的應用，其特征在于，反應介質為pH值為8.0的Tris-HCl緩沖液，反應溫度為40℃。