[發明專利]一種豬瘟弱毒病毒的培養方法

有效

• 申請號: 202010032054.1
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111172097B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發明（設計）人: 羅琦;朱佳;張萬林;顧超男;金京勛;夏麗君;莫一群;支銀;王祥;童佳琪
• 申請（專利權）人: 中海生物制藥（泰州）有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N7/08;A61K39/187;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京象合知識產權代理事務所(普通合伙) 11893
• 代理人: 封明艷;鄭慧娟

1.一種維持原代或傳代細胞系單層的培養方法，其特征在于，培養所用的細胞培養維持液中添加DMSO與IBMX，其中DMSO的添加量為0.5%(V/V)-1.5%?(V/V)；IBMX的添加量為100ug/L-10mg/L；所述原代細胞為犢牛睪丸細胞或犢牛腎細胞，所述傳代細胞系為：BT細胞系、豬睪丸傳代細胞系、Vero細胞或豬腎傳代細胞系。

2.如權利要求1所述的維持傳代細胞系單層的培養方法，其特征在于，培養所用的細胞培養維持液為：水解乳蛋白-漢克氏液、a-MEM、DMEM、1640或M199。

3.按照權利要求1或2所述的維持傳代細胞系單層的培養方法，其特征在于：所述細胞系的培養方式為單層貼壁培養、微載體懸浮培養或固定化培養。

4.一種豬瘟弱毒疫苗的培養方法，其包括下述步驟:

(1)?如權利要求1至3任一項所述的方法培養細胞系;

(2)?將豬瘟活疫苗生產種毒接種培養好的傳代細胞系。

5.如權利要求4所述的豬瘟弱毒疫苗的培養方法,其特征在于：進一步還包括：(3)將豬瘟弱毒疫苗株進行病毒增殖,進行多次收獲。

6.如權利要求5所述的豬瘟弱毒疫苗的培養方法,其特征在于：進一步還包括：(4)在收獲的病毒液中加入凍干保護劑和抗生素進行配苗、冷凍干燥,即得豬瘟弱毒疫苗。

7.如權利要求5所述的豬瘟弱毒疫苗的培養方法，其特征在于：步驟(2)?中豬瘟病毒生產維持液含有二甲基亞砜(DMSO)的含量為0.1%(V/V)-1.0%?(V/V)。

8.如權利要求5所述的豬瘟弱毒疫苗的培養方法,其特征在于：步驟(2)?中將豬瘟活疫苗生產種毒以感染劑量0.1-0.5MOI接種到培養好的傳代細胞系上進行培養，接種5日作第一次收獲換液，以后每隔4日收獲換液，收獲超過15次。