[發明專利]腈水解酶突變體及在普瑞巴林手性中間體合成中的應用有效
| 申請號： | 202010032050.3 | 申請日： | 2020-01-13 |
| 公開（公告）號： | CN111100856B | 公開（公告）日： | 2021-12-07 |
| 發明（設計）人： | 鄭仁朝;劉爽;盧夏鋒;吳哲明;鄭裕國 | 申請（專利權）人： | 浙江工業大學 |
| 主分類號： | C12N9/78 | 分類號： | C12N9/78;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 韓聰 |
| 地址： | 310014 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 水解 突變體 巴林 手性 中間體 合成 中的 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種腈水解酶突變體，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4。
2.一種編碼如權利要求1所述的腈水解酶突變體的編碼基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3。
3.一種包含如權利要求2所述的編碼基因的重組載體。
4.一種包含如權利要求3所述的重組載體的重組基因工程菌。
5.如權利要求1所述的腈水解酶突變體在催化外消旋異丁基丁二腈制備(S)-3-氰基-5-甲基己酸中的應用。
6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，包括：以含有腈水解酶突變體編碼基因的工程菌經發酵培養后離心獲得的菌體、菌體固定化細胞、菌體超聲破碎后提取的酶或者固定化酶為催化劑，以外消旋異丁基丁二腈為底物，以pH為6.0-10.0的緩沖液為反應介質，在20-50℃、200-400r/min條件下水浴反應，反應結束后，將反應液分離純化，獲得(S)-3-氰基-5-甲基己酸。
7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，反應體系中，底物的濃度為100-130g/L，催化劑的用量以菌體干重量計為1.5g/L。
8.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述反應介質為pH值為8.0的Tris-HCl緩沖液，催化反應溫度為30℃。
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