[發明專利]一種血漿中異橙黃酮含量的檢測方法

有效

• 申請號: 202010031715.9
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111198235B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 葉煒劍;牛超;孫佳;陳根;黃曉忠
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學附屬第二醫院;溫州醫科大學附屬育英兒童醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 王術娜

本發明提供了一種血漿中異橙黃酮含量的檢測方法，屬于藥物分析領域。本發明建立了一種基于沉淀法和液質聯用技術的血漿中異橙黃酮檢測方法，可用于檢測生物體內的異橙黃酮濃度，為臨床和基礎研究提供可靠的分析手段，本發明使用蛋白質沉淀法處理含異橙黃酮的血漿樣品，通過一步沉淀反應去除雜質和內源性干擾物，在高效液相色譜的分離過程中，向流動相中加入了一定的甲酸，使異橙黃酮在電離后形成更多的加氫的準分子離子峰，對應的特征性碎片離子的豐度隨之升高，提高了檢測得靈敏度；在定量的過程中，以石吊蘭素為內標物，通過準分子離子峰→子離子的特異性的、高靈敏度的監測實現對異橙黃酮的定量檢測。

技術領域

本發明涉及藥物分析技術領域，尤其涉及一種血漿中異橙黃酮含量的檢測方法。

背景技術

異橙黃酮是一種多甲氧基黃酮，廣泛存在于多種柑橘類植物中，具有多種生物活性。分子式為C₂₀H₂₀O₇，分子量為372.1。異橙黃酮具有多種藥理活性，包括抗腫瘤、抗增殖和抗氧化作用。此外，異橙黃酮與其他藥物之間還可能存在藥物相互作用，同時服用時能夠提高一些藥物的血漿藥物濃度。對于以異橙黃酮為代表的多甲氧基黃酮的研究正日益增多，測定其在生物體內的血漿藥物濃度對于評價藥物療效和分析藥理作用等方面具有很重要的作用。據研究報道，液相色譜、紫外光譜、核磁和液質聯用等手段已經用于柑橘提取物中異橙黃酮的檢測，但這些方法無法定量檢測生物樣本中的異橙黃酮。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種血漿中異橙黃酮含量的檢測方法。本發明提基于沉淀法和液質聯用技術進行血漿中異橙黃酮檢測，可用于檢測生物體內的異橙黃酮濃度，提供了一種快速、準確、穩定的檢測方法。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種血漿中異橙黃酮含量的檢測方法，包括以下步驟：

將含異橙黃酮的血漿、石吊蘭素的甲醇溶液以及乙腈混合進行沉淀反應，將所得上清液進行液質聯用檢測，用內標法以標準曲線計算血漿中異橙黃酮的含量，所述標準曲線以異橙黃酮的濃度為橫坐標，以異橙黃酮和石吊蘭素的峰面積比值為縱坐標；

所述液質聯用檢測的高效液相色譜條件包括：色譜柱為安捷倫ZORBAX EclipsePlus C18 RRHD色譜柱，采用梯度洗脫，流動相A為含0.1vol％甲酸的水溶液，流動相B為乙腈，洗脫程序為0～0.5分鐘，流動相B的體積百分含量從95％下降到5％；0.5～1.5分鐘，流動相B的體積百分含量保持為95％；1.5～1.6分鐘，流動相B的體積百分含量從5％上升到95％；1.6～3.5分鐘，流動相B的體積百分含量保持為95％，流速為0.6mL/min，柱溫為20℃，進樣量為2μL；

所述液質聯用檢測的質譜條件包括：使用三重四級桿質譜儀，離子源為電噴霧離子源，采用正離子模式，采用多反應監測掃描模式，所述異橙黃酮的離子對為373.1→343.1和373.1→153.1，所述離子對373.1→343.1為定量離子對，所述離子對373.1→153.1為定性離子對，所述石吊蘭素的離子對為345.1→315.1，所述異橙黃酮的碰撞能量為29eV，所述石吊蘭素的碰撞能量為28eV，干燥氣流速為10L/h，干燥氣溫度為350℃，霧化氣壓力為45psi。

優選地，所述含異橙黃酮的血漿、石吊蘭素的甲醇溶液以及乙腈的體積比為30:3:500，所述石吊蘭素的甲醇溶液的濃度為2.5μg/mL。

優選地，所述沉淀反應后還包括將所得沉淀反應產物在14000g條件下離心10分鐘。