[發明專利]一種血漿中異橙黃酮含量的檢測方法

有效

• 申請號: 202010031715.9
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111198235B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 葉煒劍;牛超;孫佳;陳根;黃曉忠
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學附屬第二醫院;溫州醫科大學附屬育英兒童醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 王術娜

1.一種血漿中異橙黃酮含量的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

將含異橙黃酮的血漿、石吊蘭素的甲醇溶液以及乙腈混合進行沉淀反應，將所得上清液進行液質聯用檢測，用內標法以標準曲線計算血漿中異橙黃酮的含量，所述標準曲線以異橙黃酮的濃度為橫坐標，以異橙黃酮和石吊蘭素的峰面積比值為縱坐標；

所述液質聯用檢測的高效液相色譜條件包括：色譜柱為安捷倫ZORBAX EclipsePlusC18 RRHD色譜柱，采用梯度洗脫，流動相A為含0.1vol％甲酸的水溶液，流動相B為乙腈，洗脫程序為0～0.5分鐘，流動相A的體積百分含量從95％下降到5％，流動相B的體積百分含量從5％上升到95％；0.5～1.5分鐘，流動相A的體積百分含量保持5％，流動相B的體積百分含量保持為95％；1.5～1.6分鐘，流動相A的體積百分含量從5％上升到95％，流動相B的體積百分含量從95％下降到5％；1.6～3.5分鐘，流動相A的體積百分含量保持為95％，流動相B的體積百分含量保持為5％，流速為0.6mL/min，柱溫為20℃，進樣量為2μL；

所述液質聯用檢測的質譜條件包括：使用三重四級桿質譜儀，離子源為電噴霧離子源，采用正離子模式，采用多反應監測掃描模式，所述異橙黃酮的離子對為373.1→343.1和373.1→153.1，所述離子對373.1→343.1為定量離子對，所述離子對373.1→153.1為定性離子對，所述石吊蘭素的離子對為345.1→315.1，所述異橙黃酮的碰撞能量為29eV，所述石吊蘭素的碰撞能量為28eV，干燥氣流速為10L/h，干燥氣溫度為350℃，霧化氣壓力為45psi。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述含異橙黃酮的血漿、石吊蘭素的甲醇溶液以及乙腈的體積比為30:3:500，所述石吊蘭素的甲醇溶液的濃度為2.5μg/mL。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述沉淀反應后還包括將所得沉淀反應產物在14000g條件下離心10分鐘。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述標準曲線由包括以下步驟的方法制得：稱量1mg異橙黃酮，用甲醇溶解得到1mg/mL的異橙黃酮母液，用甲醇將所述異橙黃酮母液稀釋成10、40、150、600、2500、5000和10000ng/mL的標準曲線工作液，分別將3μL所述標準曲線工作液加到微型離心管中，然后通入氮氣將溶劑揮干，接著使用30μL空白血漿復溶異橙黃酮，得到1、4、15、60、250、500和1000ng/mL的標準曲線樣品，將所述標準曲線樣品、石吊蘭素的甲醇溶液以及乙腈混合進行沉淀反應，將所得上清液進行液質聯用檢測，使用內標法對所得數據進行處理，以異橙黃酮的濃度為橫坐標，異橙黃酮和石吊蘭素的峰面積比值為縱坐標，以1/x²為權重系數，利用加權最小二乘法進行線性回歸，得到所述標準曲線。