[發明專利]一種嵌合抗原受體-單核/巨噬細胞(CAR-M)的構建及其應用

在審

• 申請號: 202010029500.3
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN113106067A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 沈萍萍;章文龍;貝云成;黃亞紅
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;A61K35/15;A61K39/395;A61P35/00
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1.一種嵌合抗原受體-單核/巨噬細胞(CAR-M)，其特征在于，運用基因編輯手段設計、優化適于導入單核/巨噬細胞細胞膜組構，增強單核/巨噬細胞吞噬能力的嵌合抗原受體。

2.根據權利要求1所述的增強單核/巨噬細胞吞噬能力的嵌合抗原受體，包括前導肽，識別區，鉸鏈區和跨膜區/胞內信號區。

3.根據權利要求1所述的用于增強單核/巨噬細胞吞噬能力的嵌合抗原受體，其特征在于，所述前導肽為集落刺激因子2受體α(CSF2Rα)的前導肽，所述CSF2Rα前導肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根據權利要求1所述的用于增強單核/巨噬細胞吞噬能力的嵌合抗原受體，其特征在于，所述識別區為結合腫瘤抗原的單鏈抗體scFv。

5.根據權利要求1所述的用于增強單核/巨噬細胞吞噬能力的嵌合抗原受體，其特征在于，所述鉸鏈區為CD28 hinge區域，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根據權利要求1所述的用于增強單核/巨噬細胞吞噬能力的嵌合抗原受體，其特征在于，所述的跨膜/胞內信號區為能夠激活巨噬細胞吞噬信號的CD16(SEQ ID NO.4)、CD32(SEQ ID NO.5)、CD64(SEQ ID NO.6)、FCER1G(SEQ ID NO.7)或CD36(SEQ ID NO.8)分子跨膜/胞內功能區。

7.根據權利要求1所述的用于增強單核/巨噬細胞吞噬能力的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括SEQ ID NO.9-SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列。

8.一種編碼權利要求1～7中任一項所述的用于增強單核/巨噬細胞吞噬能力的嵌合抗原受體的核酸。

9.根據權利要求8所述的核酸，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列包括SEQ IDNO.14-SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列。

10.一種含有權利要求8-9中任一項所述的核酸的重組表達載體。

11.一種含有權利要求10所述的重組表達載體的單核/巨噬細胞。

12.一種權利要求11所述的單核/巨噬細胞的構建方法，其特征在于，包括重組表達載體的構建步驟、重組表達載體的包裝步驟以及將重組表達載體轉導至單核/巨噬細胞的步驟。

13.權利要求1-7中任一項所述的用于增強單核/巨噬細胞吞噬能力的嵌合抗原受體，權利要求8-9中任一項所述的核酸，權利要求10所述的重組表達載體以及權利要求11所述的單核/巨噬細胞在人類實體瘤治療中的應用。