[發明專利]一種大胡蜂肽WVC-Ⅰ及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010027002.5
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN111196840A
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發明（設計）人: 吳俊珠;杜雯雯;滕飛;楊紅;巫秀美;趙昱;劉光明
• 申請（專利權）人: 大理大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/18;C07K1/20;A61K38/10;A61P9/10
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

本發明提供一種大胡蜂肽WVC?Ⅰ及其制備方法和應用，屬于生化藥物制備技術領域，本發明以大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末為原料，通過陽離子交換高效液相色譜、陰離子交換高效液相色譜以及反相高效液相色譜共三步分離獲得的WVC?Ⅰ，運用質譜鑒定純度達到98％以上，其分子量約為1435Da。

技術領域

本發明涉及生化藥物制備技術領域，尤其涉及一種大胡蜂肽WVC-Ⅰ及其制備方法和應用。

背景技術

生物毒素是生物活性最高、毒性最大的化學物質，對探索生命運動過程和發展新藥均有重要價值。

腦血管疾病是全身性血管病變或系統性血管疾病在腦部的表現，是血管源性腦部病損的總稱，中醫俗稱“中風”，主要分為出血性腦中風和缺血性腦中風兩大類，以腦梗塞最為常見。腦中風發病急，病死率高，是世界上最重要的致死性疾病之一。目前用于治療腦中風的藥物多為化學制劑，存在毒性和副作用大的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種大胡蜂肽WVC-Ⅰ及其制備方法和應用，該大胡蜂肽WVC-Ⅰ能夠用于治療腦中風。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種胡蜂肽WVC-Ⅰ，所述大胡蜂肽WVC-Ⅰ的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本發明還提供了上述方案所述大胡蜂肽WVC-Ⅰ的制備方法，包括以下步驟：

1)將大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末和水混合溶解，離心，取上清液得到毒素溶液；

2)將步驟1)所述毒素溶液上樣陽離子交換色譜柱進行第一純化，收集0～5min出現的洗脫峰對應的洗脫液對應的洗脫液，將洗脫液凍干得到第一凍干粉，將所述第一凍干粉和雙蒸水混合溶解，得到第一純化物；

3)將步驟2)所述第一純化物上樣陰離子交換色譜柱進行第二純化，收集5～7min出現的洗脫峰對應的洗脫液對應的洗脫液，將洗脫液凍干得到第二凍干粉，將所述第二凍干粉和雙蒸水混合溶解，得到第二純化物；

4)將步驟3)所述第二純化物上樣反向交換色譜柱進行第三純化，收集30～40min出現的洗脫峰對應的洗脫液，得到大胡蜂肽WVC-Ⅰ。

優選的，步驟1)中所述大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末的質量和水的體積比為4～6mg:0.5～1.5mL。

優選的，步驟2)中所述第一純化的條件包括：色譜柱為Agilent Bio WCX；柱溫為25℃；檢測器為W2998檢測器；檢測波長為280nm；流動相的流速為3mL/min；洗脫液分別為A相0.02M NaH₂PO₄，B相0.02M Na₂HPO₄，C相1MNaCl，D相ddH₂O。

優選的，步驟2)中所述Agilent Bio WCX的內徑為4.6mm；所述Agilent Bio WCX的長度為250mm；所述Agilent Bio WCX的粒徑為10μm。

優選的，步驟3)中所述第二純化的條件包括：色譜柱為Bio Suite^TMDEAE；檢測器為DAD檢測器；檢測波長為280nm；流動相的流速為0.8mL/min；洗脫液分別為A相0.02M Tris-HCl，B相0.7M NaCl。

優選的，步驟3)中所述Bio Suite^TMDEAE的內徑為7.5mm；所述Bio Suite^TMDEAE的長度為75mm；所述Bio Suite^TMDEAE的粒徑為10μm。