[發(fā)明專利]一種大胡蜂肽WVC-Ⅰ及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010027002.5
• 申請(qǐng)日: 2020-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN111196840A
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳俊珠;杜雯雯;滕飛;楊紅;巫秀美;趙昱;劉光明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大理大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/08
• 分類號(hào): C07K7/08;C07K1/18;C07K1/20;A61K38/10;A61P9/10
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 呂紀(jì)濤

1.一種大胡蜂肽WVC-Ⅰ，所述大胡蜂肽WVC-Ⅰ的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.權(quán)利要求1所述大胡蜂肽WVC-Ⅰ的制備方法，包括以下步驟：

1)將大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末和水混合溶解，離心，取上清液得到毒素溶液；所述毒腺分泌物的凍干粉末由去除雜質(zhì)的大胡蜂受刺激后分泌的毒液精制而成，其中含有60％的多肽和蛋白質(zhì)；

2)將步驟1)所述毒素溶液上樣陽離子交換色譜柱進(jìn)行第一純化，收集0～5min出現(xiàn)的洗脫峰對(duì)應(yīng)的洗脫液對(duì)應(yīng)的洗脫液，將洗脫液凍干得到第一凍干粉，將所述第一凍干粉和雙蒸水混合溶解，得到第一純化物；

3)將步驟2)所述第一純化物上樣陰離子交換色譜柱進(jìn)行第二純化，收集5～7min出現(xiàn)的洗脫峰對(duì)應(yīng)的洗脫液對(duì)應(yīng)的洗脫液，將洗脫液凍干得到第二凍干粉，將所述第二凍干粉和雙蒸水混合溶解，得到第二純化物；

4)將步驟3)所述第二純化物上樣反向交換色譜柱進(jìn)行第三純化，收集30～40min出現(xiàn)的洗脫峰對(duì)應(yīng)的洗脫液，得到大胡蜂肽WVC-Ⅰ。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末的質(zhì)量和水的體積比為4～6mg:0.5～1.5mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述第一純化的條件包括：色譜柱為Agilent Bio WCX；檢測(cè)器為W2998檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；柱溫為25℃；流動(dòng)相的流速為3mL/min；洗脫液分別為A相0.02M NaH₂PO₄，B相0.02M Na₂HPO₄，C相1M NaCl，D相ddH₂O。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述Agilent Bio WCX的內(nèi)徑為4.6mm；所述Agilent Bio WCX的長(zhǎng)度為250mm；所述Agilent Bio WCX的粒徑為10μm。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中所述第二純化的條件包括：色譜柱為Bio Suite^TMDEAE；檢測(cè)器為DAD檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；柱溫為25℃；流動(dòng)相的流速為0.8mL/min；洗脫液分別為A相0.02M Tris-HCl，B相0.7M NaCl。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中所述Bio Suite^TMDEAE的內(nèi)徑為7.5mm；所述Bio Suite^TMDEAE的長(zhǎng)度為75mm；所述Bio Suite^TMDEAE的粒徑為10μm。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中所述第三純化的條件包括：色譜柱為Sepax Bio-C18；色譜柱的柱溫為25℃；檢測(cè)器為W2998檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；流動(dòng)相的流速為2mL/min；洗脫液分別為A相含體積含量為0.1％的TFA的水，B相含體積含量為0.1％的TFA的乙腈。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中所述Sepax Bio-C18的內(nèi)徑為10mm；所述Sepax Bio-C18的長(zhǎng)度為250mm；所述Sepax Bio-C18的粒徑為10μm；所述SepaxBio-C18的孔徑為

10.權(quán)利要求1所述大胡蜂肽WVC-Ⅰ在制備治療心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。