[發明專利]一種大胡蜂肽WVC-Ⅰ及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010027002.5
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN111196840A
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發明（設計）人: 吳俊珠;杜雯雯;滕飛;楊紅;巫秀美;趙昱;劉光明
• 申請（專利權）人: 大理大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/18;C07K1/20;A61K38/10;A61P9/10
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

1.一種大胡蜂肽WVC-Ⅰ，所述大胡蜂肽WVC-Ⅰ的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.權利要求1所述大胡蜂肽WVC-Ⅰ的制備方法，包括以下步驟：

1)將大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末和水混合溶解，離心，取上清液得到毒素溶液；所述毒腺分泌物的凍干粉末由去除雜質的大胡蜂受刺激后分泌的毒液精制而成，其中含有60％的多肽和蛋白質；

2)將步驟1)所述毒素溶液上樣陽離子交換色譜柱進行第一純化，收集0～5min出現的洗脫峰對應的洗脫液對應的洗脫液，將洗脫液凍干得到第一凍干粉，將所述第一凍干粉和雙蒸水混合溶解，得到第一純化物；

3)將步驟2)所述第一純化物上樣陰離子交換色譜柱進行第二純化，收集5～7min出現的洗脫峰對應的洗脫液對應的洗脫液，將洗脫液凍干得到第二凍干粉，將所述第二凍干粉和雙蒸水混合溶解，得到第二純化物；

4)將步驟3)所述第二純化物上樣反向交換色譜柱進行第三純化，收集30～40min出現的洗脫峰對應的洗脫液，得到大胡蜂肽WVC-Ⅰ。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述大胡蜂毒腺分泌物的凍干粉末的質量和水的體積比為4～6mg:0.5～1.5mL。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述第一純化的條件包括：色譜柱為Agilent Bio WCX；檢測器為W2998檢測器；檢測波長為280nm；柱溫為25℃；流動相的流速為3mL/min；洗脫液分別為A相0.02M NaH₂PO₄，B相0.02M Na₂HPO₄，C相1M NaCl，D相ddH₂O。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述Agilent Bio WCX的內徑為4.6mm；所述Agilent Bio WCX的長度為250mm；所述Agilent Bio WCX的粒徑為10μm。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中所述第二純化的條件包括：色譜柱為Bio Suite^TMDEAE；檢測器為DAD檢測器；檢測波長為280nm；柱溫為25℃；流動相的流速為0.8mL/min；洗脫液分別為A相0.02M Tris-HCl，B相0.7M NaCl。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中所述Bio Suite^TMDEAE的內徑為7.5mm；所述Bio Suite^TMDEAE的長度為75mm；所述Bio Suite^TMDEAE的粒徑為10μm。

8.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中所述第三純化的條件包括：色譜柱為Sepax Bio-C18；色譜柱的柱溫為25℃；檢測器為W2998檢測器；檢測波長為280nm；流動相的流速為2mL/min；洗脫液分別為A相含體積含量為0.1％的TFA的水，B相含體積含量為0.1％的TFA的乙腈。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中所述Sepax Bio-C18的內徑為10mm；所述Sepax Bio-C18的長度為250mm；所述Sepax Bio-C18的粒徑為10μm；所述SepaxBio-C18的孔徑為

10.權利要求1所述大胡蜂肽WVC-Ⅰ在制備治療心肌缺血的藥物中的應用。