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[發(fā)明專利]一種重組EBV gHgL免疫原的制備方法及其應用有效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 202010026943.7 申請日: 2020-01-10
公開(公告)號: CN111154803B 公開(公告)日: 2022-07-22
發(fā)明(設(shè)計)人: 段良偉;王輝;鄭前前;牛玉娜;牛志國;張佳璐;劉夢楠 申請(專利權(quán))人: 新鄉(xiāng)醫(yī)學院
主分類號: C12N15/85 分類號: C12N15/85;C07K14/03;A61K39/245;A61P31/22
代理公司: 北京金智普華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401 代理人: 楊采良
地址: 453003 *** 國省代碼: 河南;41
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 重組 ebv ghgl 免疫原 制備 方法 及其 應用
【權(quán)利要求書】:

1.一種重組EBV gHgL免疫原的制備方法,其特征在于,包括:將gHgL的基因片段分別克隆入昆蟲表達載體pMT;分別進行無內(nèi)毒素質(zhì)粒提取后,與抗性篩選質(zhì)粒pCoBlast共轉(zhuǎn)染黑腹果蠅 Schneider2 細胞,進行陽性克隆篩選獲得高效分泌表達gHgL的S2穩(wěn)定細胞系;細胞擴大培養(yǎng)并誘導表達即可獲得重組EBV gHgL蛋白;gH的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示;gL的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組EBV gHgL免疫原的制備方法,其特征在于:以不同的gHgL重組質(zhì)粒比例與抗性篩選質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染黑腹果蠅 Schneider2 細胞后,用殺稻瘟菌素進行陽性克隆篩選。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組EBV gHgL免疫原的制備方法,其特征在于:擴大培養(yǎng)階段使用硫酸銅誘導重組蛋白的表達。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種重組EBV gHgL免疫原的制備方法,其特征在于:細胞擴大培養(yǎng)獲得重組EBV gHgL蛋白后,經(jīng)鎳柱親和層析和凝膠過濾層析對重組蛋白進行兩步純化。

5.如權(quán)利要求1-4任一所述的一種重組EBV gHgL免疫原的制備方法在制備重組EBVgHgL蛋白中的應用。

6.一種利用如權(quán)利要求1-4任一所述的重組EBV gHgL免疫原的制備方法制備的重組EBV gHgL蛋白在制備用于治療愛潑斯坦巴爾病毒感染的藥物、單克隆抗體或疫苗中的應用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組EBV gHgL蛋白在制備用于治療愛潑斯坦巴爾病毒感染的藥物、單克隆抗體或疫苗中的應用,其特征在于:所述疫苗包括EBV亞單位疫苗,或gB和gp350聯(lián)合疫苗;所述單克隆抗體包括靶向gHgL的中和抗體。

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