[發明專利]一種嗅鞘細胞的純化培養方法有效
| 申請號： | 202010023267.8 | 申請日： | 2020-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN111019895B | 公開（公告）日： | 2023-07-25 |
| 發明（設計）人： | 沈憶新;李健;張宇 | 申請（專利權）人： | 蘇州大學附屬第二醫院 |
| 主分類號： | C12N5/079 | 分類號： | C12N5/079 |
| 代理公司： | 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 215000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 純化 培養 方法 | ||
1.一種嗅鞘細胞的純化培養方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、將新獲取的嗅鞘細胞經消化處理后，采用完全培養基進行懸浮培養20~30h，得到細胞懸液；
S2、將細胞懸液進行貼壁培養，待細胞完全貼壁后，更換含有3~7?μM?Forskolin的完全培養基進行貼壁培養，待細胞長滿培養皿后，用含有EDTA?的0.05~0.10%胰酶消化2~3min后停止消化，并采用緩沖液清洗培養皿；
S3、采用含有3~7?μM?Forskolin的完全培養基繼續培養S2培養皿底部粘附的細胞，待細胞長滿培養皿后，采用0.20~0.30%胰酶消化1~5min，將細胞吹打下來后停止消化，將細胞離心后采用含有3~7?μM?Forskolin的完全培養基重懸細胞制備得到細胞懸液；
S4、重復S2、S3步驟至得到純化的嗅鞘細胞；所述的完全培養基為含有10%新生胎牛血清的DMEM/F12培養基；
所述的停止消化采用的是含有2%新生胎牛血清的DMEM/F12培養基。
2.根據權利要求1所述的純化培養方法，其特征在于，所述的完全培養基中包含谷氨酰胺、青霉素和鏈霉素。
3.根據權利要求1所述的純化培養方法，其特征在于，S1中，懸浮培養采用的是未進行包被的培養皿。
4.根據權利要求1所述的純化培養方法，其特征在于，S2、S3中，貼壁培養采用的是包被PLL的培養皿。
5.根據權利要求1所述的純化培養方法，其特征在于，S4中，重復S2、S3步驟為3~6次。
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