[發明專利]生物分子完全免固定的紙基電化學傳感器的構建

在審

• 申請號: 202010021198.7
• 申請日: 2020-01-09
• 公開（公告）號: CN111024793A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 于京華;史慧慧;王衍虎
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48;C12Q1/6825
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 趙鳳

1.生物分子完全免固定的紙基電化學傳感器的構建，其特征在于該方法包括以下步驟：

（1）在計算機上用Adobe illustrator CS4設計紙芯片的圖案，將設計好的打印圖案通過蠟打印機打印在A4色譜紙上，然后將打印過的色譜紙放在烘箱中，在100 ℃加熱60 s形成疏水區域和親水的工作區域；

（2）用絲網印刷技術在步驟（1）中獲得的紙芯片上印刷三電極體系（碳工作電極、碳對電極和Ag/AgCl參比電極）；

（3）利用原位還原法在碳電極的工作區域生長金納米，其具體步驟為：首先，20 μL金納米粒子溶液滴涂在電極表面，在室溫下干燥，此過程重復三次，隨后稱取0.013 g鹽酸羥胺溶解于1 mL去離子水中，加入1 mL質量分數1 %的氯金酸，充分搖晃后，量取20 μL滴在電極表面，室溫下干燥即可，最后，將電極在1 mM葫蘆[7]脲中培育1 h;

（4）取30 μL 10 μM亞甲基藍標記的DNA 和20 μL 不同濃度的miRNA溶解在37 μLTris-HCl 緩沖液中，在37℃下培育2 h，然后將3 μL T7 核酸外切酶 (2 U/μL) 和 10 μL1× NEB 緩沖液加入到上述溶液中，在37 ℃下培育1 h;

（5）將步驟（4）中獲得的溶液添加到磷酸鹽緩沖溶液中，然后將上述溶液滴加到步驟（3）的電極的工作區域，利用三電極系統通過微分脈沖伏安法進行電化學信號檢測。

2.根據權利要求1所述的生物分子完全免固定的紙基電化學傳感器的構建，其特征是金種子溶液合成過程是：取90 mL二次水置于三口燒瓶中并加熱到90 ℃，然后加入0.5 -0.8 mL質量分數為1 %的氯金酸溶液，持續加熱至96 ℃，反應1 min后，加入2.5 mL質量分數為1 %的檸檬酸鈉，在攪拌下反應15 min，得到金納米粒子溶液。

3.根據權利要求1所述的生物分子完全免固定的紙基電化學傳感器的構建，其特征是1×NEB 緩沖液配制過程是取20 mM Tris-HAc緩沖液，依次加入0.2145g四水乙酸鎂、0.49 g醋酸鉀、0.0154 g的二硫蘇糖醇，隨后用醋酸調節溶液pH到7.9，定容到100 mL。