[發明專利]一種NK細胞體外大規模誘導擴增培養方法在審
| 申請號： | 202010020487.5 | 申請日： | 2020-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN111117960A | 公開（公告）日： | 2020-05-08 |
| 發明（設計）人： | 陳勇 | 申請（專利權）人： | 上海奕杉生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京中索知識產權代理有限公司 11640 | 代理人： | 趙登陽 |
| 地址： | 201400 上海市奉賢區滬*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 nk 細胞 體外 大規模 誘導 擴增 培養 方法 | ||
1.一種NK細胞體外大規模誘導擴增培養方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1：采集外周血并分離外周血單個核細胞；
S2：將細胞接種至包被CD16和CD137L激活抗體的培養瓶中；
S3：加入誘導培養基于細胞培養瓶內，使細胞密度為2-4*106個/ml，此時種板為day0，將誘導因子加入到無血清淋巴細胞培養基中即配置成誘導培養基；
S4：培養4d后加入激活培養基，將激活因子加入到無血清淋巴細胞培養基中即配置成激活培養基；
S5：培養9d后加入擴增培養基，將擴增因子加入到無血清淋巴細胞培養基中即配置成擴增培養基。
2.根據權利要求1所述的一種NK細胞體外大規模誘導擴增培養方法，其特征在于，所述誘導因子記為NK Grow3，NK Grow4和NK Grow5，所述NK Grow3為細胞因子IL-2，濃度為10-100ng/ml，所述NK Grow4為細胞因子IL18，濃度為10-50ng/ml，所述NK Grow5為細胞因子IL15,濃度為10-100ng/ml。
3.根據權利要求1所述的一種NK細胞體外大規模誘導擴增培養方法，其特征在于，所述激活因子記為NK Grow6和NK Grow7，所述NK Grow6為細胞因子IL-15，濃度為10-100ng/ml，所述NK Grow7為細胞因子IL21，濃度為10-50ng/ml。
4.根據權利要求1所述的一種NK細胞體外大規模誘導擴增培養方法，其特征在于，所述擴增因子記為NK Grow8，所述NK Grow8為細胞因子IL-2，濃度為10-100ng/ml。
5.根據權利要求2所述的一種NK細胞體外大規模誘導擴增培養方法，其特征在于，所述NK Grow3為細胞因子IL-2，濃度為50ng/ml，所述NK Grow4為細胞因子IL18，濃度為25ng/ml，所述NK Grow5為細胞因子IL15,濃度為50ng/ml。
6.根據權利要求3所述的一種NK細胞體外大規模誘導擴增培養方法，其特征在于，所述NK Grow6為細胞因子IL-15，濃度為50ng/ml，所述NK Grow7為細胞因子IL21，濃度為25ng/ml。
7.根據權利要求4所述的一種NK細胞體外大規模誘導擴增培養方法，其特征在于，所述NK Grow8為細胞因子IL-2，濃度為50ng/ml。
8.根據權利要求1所述的一種NK細胞體外大規模誘導擴增培養方法，其特征在于，所述無血清淋巴細胞培養基為AlyS505NK培養基或XVIVO500培養基。
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