[發(fā)明專利]一種鴨呼腸孤病毒、鴨細小病毒和鴨星狀病毒三價卵黃抗體的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010020486.0
• 申請日: 2020-01-09
• 公開（公告）號: CN111320689A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 嚴悌昆;張毓金;謝秉超;黃淑芳;張桂平
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州漁躍生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/08;C07K16/02
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鴨呼腸孤病毒、鴨細小病毒和鴨星狀病毒三價卵黃抗體的制備方法。本發(fā)明提供的三價卵黃抗體是利用鴨呼腸孤病毒、鴨細小病毒和鴨星狀病毒三聯(lián)滅活疫苗免疫雞，制得高免雞蛋，經(jīng)過研磨破碎，混合攪拌，并對收集到的上清液進行純化、濃縮、無菌處理制得。按照本發(fā)明方法制得的三價卵黃抗體，性質(zhì)穩(wěn)定、效價活性強，適合呼腸孤病毒、細小病毒和星狀病毒三價精制卵黃抗體的大規(guī)模制備。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鴨呼腸孤病毒、鴨細小病毒和鴨星狀病毒三價卵黃抗體的制備方法。

背景技術(shù)

鴨呼腸孤病毒(DRV)、鴨細小病毒和鴨星狀病毒(DAstv)目前是世界上的研究熱點，對鴨、鵝均具有致病性，主要病變表現(xiàn)為脾臟壞死和肝臟出血，該病可直接引發(fā)養(yǎng)15日齡以內(nèi)的雛鴨和雛鵝出現(xiàn)30％以上的死亡率，此外其臨床上也常常與鴨疫李默是桿菌，大腸桿菌和星狀病毒等并發(fā)感染，導致鴨和鵝出現(xiàn)明顯呼吸道病，關(guān)節(jié)炎，及嚴重的產(chǎn)蛋下降及畸形蛋等問題。因此目前該病已經(jīng)成為嚴重影響?zhàn)B鴨和養(yǎng)鵝產(chǎn)業(yè)的重大疫病之一。

卵黃抗體是指從免疫禽蛋中提取的針對特定抗原的抗體，由于卵黃中僅有 IgG類抗體，因此稱其為卵黃免疫球蛋白IgG(yolk antibody)，簡稱為IgY。當機體受到外來抗原刺激后，法氏囊內(nèi)的B細胞分化成為漿細胞，分泌特異性抗體進入血液循環(huán)，當血液流經(jīng)卵巢時，特異性抗體(主要是IgG)在卵細胞中逐漸蓄積，形成卵黃抗體，IgG移行進入卵細胞是受體作用的結(jié)果，因而IgG可在卵細胞中大量蓄積，濃度高于血液中的IgG，單個卵黃(約15ml)中卵黃抗體含量可達200mg左右。再加之從卵黃中提取抗體較從動物血清中提取抗體簡便，因此卵黃抗體具有明顯的技術(shù)優(yōu)勢。

此外，卵黃抗體在多種環(huán)境中有較好的穩(wěn)定性。在低于75℃條件下，卵黃抗體具有良好的熱穩(wěn)定性，90℃處理15min后，大部分卵黃抗體喪失結(jié)合活性，在pH4時，僅有少量卵黃抗體失去活性。在pH4～12范圍內(nèi)，卵黃抗體的活性幾乎不受影響，在pH12時，卵黃抗體迅速失去結(jié)合活性。實驗表明，卵黃抗體具有耐受反復凍融的特性，即使經(jīng)過5次凍融，其抗原結(jié)合活性幾乎不受影響。在室溫下可保存6個月，4℃保存可達5年以上，活性僅下降5％左右。

由于具備上述優(yōu)越的生物學、理化特性，因此卵黃抗體的制備與應用受到了越來越多的關(guān)注。然而由于現(xiàn)有技術(shù)的卵黃抗體生產(chǎn)工藝存在缺陷，因此極大的影響了產(chǎn)品品質(zhì)，例如一些粗制抗體產(chǎn)品不僅抗體效價難以保證，而且通常會污染禽淋巴白血病病毒、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生因子、大腸桿菌、沙門氏菌、支原體等外源性致病原。在注射抗體預防或者治療疾病時，極有可能造成垂直傳播病原或其他一些細菌、病毒的擴散甚至疾病的爆發(fā)，帶來嚴重的經(jīng)濟損失。此外，由于這些粗制抗體的制造者往往試圖通過添加大劑量的甲醛、青、鏈霉素等措施來延長其產(chǎn)品的保質(zhì)期，增加所謂的使用“安全性”，但結(jié)果往往是造成更大的應激和嚴重的藥物殘留。而且粗制抗體中含有大量的脂蛋白及卵磷脂等大分子物質(zhì)，這些物質(zhì)沒有任何治療作用且體積大，粘稠度高，注射困難且難以吸收，注射后對機體的應激大，易造成過敏反應，是外源性致熱原。注射后易造成注射部位局部組織出血、腫脹、壞死，壞死的組織會導致機體發(fā)熱，而發(fā)熱會造成機體神經(jīng)調(diào)節(jié)、體液調(diào)節(jié)等功能的紊亂，從而導致發(fā)病群體采食量減少，抵抗力下降，繼發(fā)其他疾病。另外一方面，卵黃抗體中存在的不飽和脂肪酸和磷脂類十分容易氧化變質(zhì)，從而使卵黃抗體的保存期大大縮短，因此，建立一種可大量生產(chǎn)、產(chǎn)品純度和活性高的提純方法對卵黃抗體的廣泛應用將具有重要意義。

目前對卵黃抗體的分離提純主要是利用抗體蛋白的親水性和疏水性進行分離。主要方法有鹽析法、超濾濃縮法、層析法、離子交換層析法、正辛酸沉淀等。

發(fā)明內(nèi)容