[發(fā)明專利]一種鴨呼腸孤病毒、鴨細(xì)小病毒和鴨星狀病毒三價(jià)卵黃抗體的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010020486.0
• 申請(qǐng)日: 2020-01-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111320689A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 嚴(yán)悌昆;張毓金;謝秉超;黃淑芳;張桂平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州漁躍生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C07K16/08;C07K16/02
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

1.一種三價(jià)卵黃抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、利用鴨呼腸孤病毒、鴨細(xì)小病毒和鴨星狀病毒三聯(lián)滅活疫苗免疫100日齡的海蘭褐雞，獲得高免雞蛋，去蛋清，用75％酒精進(jìn)行表面消毒，得高免雞蛋蛋黃；

S2、收集步驟S1獲得的高免雞蛋蛋黃，去除卵黃膜和系帶后利用膠體磨進(jìn)行破碎，得蛋黃液；

S3、將步驟S2得到的蛋黃液與0.1mol/L的pH為7.2～7.4的醋酸鹽緩沖溶液以1：6～8的體積比混合，然后向其中加入總體積0.05～0.1％的聚乙二醇15-羥基硬脂酸酯，攪拌混合均勻，然后加入總體積0.3～0.5％的β-環(huán)糊精，充分?jǐn)嚢瑁?℃靜置1～2h，充分平衡后在4℃，4000r/min離心15～20min，收集上清液；

S4、將步驟S3收集的上清液進(jìn)行純化、濃縮，無(wú)菌處理，即得。

2.如權(quán)利要求1所述的三價(jià)卵黃抗體的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述的鴨呼腸孤病毒、鴨細(xì)小病毒和鴨星狀病毒三聯(lián)滅活疫苗用傳代細(xì)胞系LMH細(xì)胞生產(chǎn)。

3.如權(quán)利要求1所述的三價(jià)卵黃抗體的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述高免雞蛋蛋黃的具體制備方法為：給100日齡的海蘭褐雞皮下注射1mL鴨呼腸孤病毒、鴨細(xì)小病毒和鴨星狀病毒三聯(lián)滅活疫苗免疫，共免疫3次，每相鄰兩次免疫的時(shí)間間隔為21d，在最后一次免疫后5d收集雞蛋，即得。

4.如權(quán)利要求1所述的三價(jià)卵黃抗體的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述蛋黃液的具體制備方法為：將高免雞蛋用75％酒精進(jìn)行表面消毒，分離出蛋黃，過(guò)60目尼龍篩，去除卵黃膜和系帶，然后置于膠體磨中研磨4～6min，即得。

5.如權(quán)利要求1所述的三價(jià)卵黃抗體的制備方法，其特征在于，步驟S3中所述醋酸鹽緩沖液的制備過(guò)程為：每1000mL純化水中溶解0.886g乙酸鈉和2.82ml冰乙酸，然后利用1mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至4.8。

6.如權(quán)利要求1所述的三價(jià)卵黃抗體的制備方法，其特征在于，步驟S3中所述聚乙二醇15-羥基硬脂酸酯的終濃度為0.6～1.2％；所述β-環(huán)糊精的終濃度為1.0～2.0％。

7.如權(quán)利要求6所述的三價(jià)卵黃抗體的制備方法，其特征在于，步驟S3中所述聚乙二醇15-羥基硬脂酸酯的終濃度為0.8％；所述β-環(huán)糊精的終濃度為1.2％。

8.如權(quán)利要求1所述的三價(jià)卵黃抗體的制備方法，其特征在于，步驟S4中所述無(wú)菌處理具體操作為：將經(jīng)純化、濃縮后得到的濃縮液使用過(guò)濾精度為0.45μm的筒式濾芯精濾，再用過(guò)濾精度為0.20μm的筒式濾芯過(guò)濾除菌，無(wú)菌操作分裝，即得。