[發明專利]一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法

有效

• 申請號: 202010020421.6
• 申請日: 2020-01-09
• 公開（公告）號: CN111088298B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 吳雨昌
• 申請（專利權）人: 杭州吾尚食品有限公司
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;C12P17/16;C12P19/04;C12P39/00;C12R1/07;C12R1/225;C12R1/01
• 代理公司: 北京知了蟬專利代理事務所(普通合伙) 11959
• 代理人: 張金鳳

1.一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）制備種子液：將經過活化的凝結芽孢桿菌接種于營養肉湯培養基，在37℃、80r/min條件下搖床振蕩培養20~28h，制成凝結芽孢桿菌種子液；將經過活化的鼠李糖乳桿菌和長雙歧桿菌以1:1的比例共同接種于改良MRS液體培養基，在37℃條件下靜置培養20~28h，制成乳酸菌種子液；

（2）原料處理：將新鮮金線蓮全草清洗干凈后進行低溫真空干燥，使水分含量降到5%以下，再采用分步粉碎方式制備成金線蓮超微粉；

（3）復合菌種分段發酵：配制含有金線蓮超微粉的發酵培養基，115℃滅菌20min后冷卻至室溫，調節初始pH為6.5~7.0，先接入凝結芽孢桿菌種子液，在溫度35~40℃、轉速80~120r/min的條件下發酵培養40~50h，再接入乳酸菌種子液，在溫度35~40℃、靜置的條件下繼續發酵培養65~75h；

（4）發酵完成后，將發酵產物于-20℃預凍結后，在真空度為0.05~0.1MPa、冷凍溫度為-60~-70℃的條件下冷凍干燥并粉碎，制成凍干粉。

2.根據權利要求1所述的一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，凝結芽孢桿菌的活化方法為：將菌株甘油凍存管在室溫下復蘇，用無菌接種環挑取少量菌種劃線接種于營養瓊脂培養基，在37℃倒置培養24h。

3.根據權利要求1所述的一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，鼠李糖乳桿菌和長雙歧桿菌的活化方法為：將菌株甘油凍存管在室溫下復蘇，以2%的接種量接種于MRS液體培養基中，在37℃靜置培養12h，如此傳代2次。

4.根據權利要求1所述的一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，改良MRS液體培養基的配方為：蛋白胨10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母膏5.0g/L，葡萄糖5.0g/L，乙酸鈉5.0g/L，檸檬酸二銨2.0g/L，吐溫-80 1.0g/L，K₂HPO₄2.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2g/L，MnSO₄·H₂O 0.05g/L，CaCO₃ 2.0g/L。

5.根據權利要求1所述的一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，低溫真空干燥的溫度為40~45℃，真空度為200~300Pa。

6.根據權利要求1所述的一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，分步粉碎的具體方法為：先將干燥后的金線蓮用破碎機進行粗粉碎，過100目篩；再用氣流式超微粉碎機對金線蓮粗粉進行二次粉碎，使顆粒粒徑達到1~75μm級別。

7.根據權利要求1所述的一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，發酵培養基的成分為：金線蓮超微粉100-200g/L，蔗糖10-20g/L，黑豆粉20-30g/L，NaCl 0.8-1.2g/L，K₂HPO₄ 1.6-2.4g/L，CaCO₃ 0.07-0.13g/L，琥珀酸鈉0.8-1.2g/L，維生素溶液3.0-5.0ml/L。

8.根據權利要求1所述的一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，凝結芽孢桿菌種子液的接種量為1%~5%，乳酸菌種子液的接種量為6%~10%。

9.根據權利要求7所述的一種利用益生菌發酵提高金線蓮活性成分含量的方法，其特征在于，所述維生素溶液的成分為：生物素2.0mg/L，葉酸2.0mg/L，維生素B₆10.0mg/L，鹽酸硫胺 5.0mg/L，核黃素5.0mg/L，煙酸5.0mg/L，D-泛酸鈣5.0mg/L，維生素B₁₂0.10mg/L，硫辛酸5.0mg/L。