[發明專利]臍帶間充質干細胞的三維培養方法

有效

• 申請號: 202010018006.7
• 申請日: 2020-01-08
• 公開（公告）號: CN111139220B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 胡士庶;宋蕓娟;劉露林;沈潔;沈艷
• 申請（專利權）人: 深圳市曠逸生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 單驍越

本發明涉及一種臍帶間充質干細胞的三維培養方法。該臍帶間充質干細胞的三維培養方法包括以下步驟：將臍帶間充質干細胞接種于細胞培養器中，然后在水平轉速為20rpm～40rpm條件下旋轉培養臍帶間充質干細胞，其中，細胞培養器的底部的內表面為弧面，底部的內表面經抗細胞貼附處理。上述臍帶間充質干細胞的三維培養方法能夠提高臍帶間充質干細胞所分泌外泌體的產量。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種臍帶間充質干細胞的三維培養 方法。

背景技術

外泌體是由細胞經過“內吞-融合-外排”等一系列調控過程而形成，并主動 分泌至胞外的大小均一，分子直徑為40nm～100nm的亞細胞雙層膜囊泡，其內 含有與細胞來源相關的蛋白質、miRNA及mRNA等物質。外泌體既可以通過質 膜受體直接激活受體細胞，也可以轉運蛋白質、miRNA及mRNA甚至細胞器進 入受體細胞內，同時也可以攜帶處于不同病例狀態下的細胞所含有的特異性物 質，從而在生理學和病理學上都發揮著重要的作用。

臍帶間充質干細胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)，具 有自我更新和多向分化潛能，在一定條件下能分化成多種成體細胞，可參與受 損組織的再生修復。近年來，隨著對間充質干細胞研究的不斷深入，其分泌的 外泌體已成為研究熱點。

傳統的臍帶間充質干細胞培養采用二維培養方法(平面法)，培養面的面積 限制了干細胞的擴增倍數，產量少，不能滿足市場對外泌體的需求。

發明內容

基于此，有必要提供一種臍帶間充質干細胞的三維培養方法，該以三維培 養方法培養的臍帶間充質干細胞分泌外泌體的量高。

一種臍帶間充質干細胞的三維培養方法，包括以下步驟：

將臍帶間充質干細胞接種于細胞培養器中，然后在水平轉速為20rpm～40 rpm條件下旋轉培養所述臍帶間充質干細胞，其中，所述細胞培養器的底部的內 表面為弧面，所述底部的內表面經抗細胞貼附處理。

上述臍帶間充質干細胞的三維培養方法通過將臍帶間充質干細胞接種搭配 底部經抗細胞貼附處理的細胞培養器中，并在水平轉速為20rpm～40rpm條件下 旋轉培養，使得臍帶間充質干細胞在培養過程中維持細胞團塊的三維構象從而 模擬細胞在體內的生長環境，使臍帶間充質干細胞之間接觸緊密，分子信號交 流更加頻繁，促進干細胞各種細胞因子表達水平的提高，提高外泌體表達量， 提高外泌體的產量高。

在其中一個實施例中，所述弧面為圓弧面，所述細胞培養器為U型細胞板。

在其中一個實施例中，所述旋轉培養的水平轉速為30rpm。

在其中一個實施例中，培養所述臍帶間充質干細胞的培養基為以Ultroser G 替代血清的干細胞培養基。

在其中一個實施例中，所述干細胞培養基中Ultroser G的質量百分含量為 1.5％～2.5％。

在其中一個實施例中，所述將臍帶間充質干細胞接種于細胞培養器中的步 驟中，接種密度為50個/μL～80個/μL。

在其中一個實施例中，在所述將臍帶間充質干細胞接種于細胞培養器中的 步驟之后，還包括將接種在所述細胞培養器中的臍帶間充質干細胞在37℃、20 rpm～40rpm條件下水平旋轉孵育的步驟。

在其中一個實施例中，在所述孵育的步驟之后，還包括將孵育后的臍帶間 充質干細胞在450rmp～550rmp的轉速下離心2.5min～3.5min的步驟。

在其中一個實施例中，還包括以臍帶為原料制備臍帶間充質干細胞的步驟。

在其中一個實施例中，所述以臍帶為原料制備臍帶間充質干細胞的步驟包 括：