[發明專利]分室培養連續擴繁叢枝菌根真菌孢子的方法

有效

• 申請號: 202010017883.2
• 申請日: 2020-01-08
• 公開（公告）號: CN111165266B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 唐明;王志豪;胡文濤;陳輝;梁京威;劉紫怡
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: A01G18/00
• 分類號: A01G18/00;A01G18/60;C12N3/00;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 西安智萃知識產權代理有限公司 61221
• 代理人: 李炳輝

本發明分室培養連續擴繁叢枝菌根真菌孢子的方法，是將培養室分為若干個隔離室并填充下層基質、中層基質與上層基質，進行間隔連續培植接種分離，由于叢枝菌根真菌可侵染宿主植物根系產生菌絲網，以及菌絲網的擴散與侵染性，所以只需要進行一次接種，叢枝菌根真菌孢子在相鄰的隔離室中新萌發的幼苗根系就可以被其侵染，所以相對于單盆培養法具有連續性；叢枝菌根真菌的生活史為90天，每個隔離室中的宿主植物培養120天后，經遮光處理使宿主植物死亡而產生大量叢枝菌根真菌孢子，因此每間隔的天數為120與隔離室個數的比值，即可獲得新鮮的叢枝菌根真菌孢子，相比于雙重培養體系法，本發明培養條件要求低，操作方便，培養室可循環利用，可行性高。

技術領域

本發明涉及一種擴繁叢枝菌根真菌孢子的方法，具體是一種分室培養連續擴繁叢枝菌根真菌孢子的方法，屬于微生物學領域。

背景技術

叢枝菌根真菌是專性活體營養共生的球囊菌門真菌，它不能在體外進行純培養，只能通過叢枝菌根真菌菌絲侵染活體宿主植物根系形成共生體系，然后才能產生叢枝菌根真菌孢子，叢枝菌根真菌孢子是叢枝菌根真菌的休眠體，當其遇到宿主植物時會萌發出叢枝菌根真菌菌絲，然后侵染宿主植物根系重新形成共生體系。叢枝菌根真菌可以與超過80％的陸地維管束植物形成共生體，在干旱貧瘠的土壤中，叢枝菌根真菌菌絲可以延伸至宿主植物根系生長所達到的區域范圍外，為宿主植物提供氮、磷等礦質元素和水分。此外，叢枝菌根真菌孢子產生的根外菌絲可以在宿主植物之間形成菌絲網，進行宿主植物間的物質輸送和信息傳遞。因此，研究叢枝菌根真菌與宿主植物共生的機制以及叢枝菌根真菌對宿主植物和生態系統的功能較廣泛,在生產中可以通過宿主植物根系菌根化而提高宿主植物抗逆性。然而在野外條件下有活性的野生叢枝菌根真菌孢子數目很少，無法滿足生產應用的需求，而且分離鑒定較繁瑣。叢枝菌根真菌與宿主植物根系形成共生體系后，如果使叢枝菌根真菌宿主死亡，叢枝菌根真菌菌絲就會產生大量叢枝菌根真菌孢子，為人工擴繁叢枝菌根真菌孢子提供了可能。

目前獲得叢枝菌根真菌孢子的主要方法為單盆培養法和雙重培養體系法。單盆培養法是指先種植宿主植物，然后接種叢枝菌根真菌孢子，待孢子萌發后侵染宿主植物根系，通過宿主植物生長達到孢子的擴繁。如國家知識產權局公開的《一種分層培養富集叢枝菌根真菌孢子的方法》(CN106190944B)，這種方法可以富集大量叢枝菌根真菌孢子，但是缺乏連續性，由于宿主植物生長和叢枝菌根真菌孢子的產生周期較長，所以多次擴繁就需要較長時間。雙重培養法是指在無菌條件下，對培養基上的宿主植物接種萌發叢枝菌根真菌孢子，然后叢枝菌根真菌菌絲侵入根系內部形成共生體，通過根系的生長培養叢枝菌根真菌，最終獲得叢枝菌根真菌孢子，這種方法培養條件要求嚴格且獲得的孢子數量較少，無法滿足生產應用中的大量需求。目前尚沒有一種簡單實用且可以連續獲得叢枝菌根真菌孢子的方法。

發明內容

本發明的目的是為了克服目前方法獲得叢枝菌根真菌孢子的缺陷，而公開一種分室培養連續擴繁叢枝菌根真菌孢子的方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

a.制備培養室：用隔離板將培養盆體等分為若干個隔離室，隔離板高度與培養盆體深度一致，在每個隔離板上部分別開有矩形槽，在培養盆體底端開有若干個排水孔，在隔離室底部填充具有良好吸水性、保水性及透氣性的下層基質，在下層基質上填充粒徑較大，吸水性及保水性差的中層基質，在中層基質上面分別鋪設濾布，在濾布上面分別填充蛭石與白沙體積比為1:1的混合基質至裝滿培養盆體，下層基質與中層基質填充厚度分別為培養盆體深度的五分之二和十分之一，構成培養室，培養室為圓柱形或矩形或其它形狀，培養室下面放置托盤；

b.首先在其中任一個隔離室中播種宿主植物種子，待其長成幼苗后在根系附近接種從野外分離且鑒定的或人工擴繁的叢枝菌根真菌孢子，通過隔離室中的宿主植物進行叢枝菌根真菌孢子的連續擴繁，每間隔的天數為120與隔離室個數的比值，依照隔離室的排列順序在相鄰隔離室中相繼播種宿主植物種子，使其長成幼苗但不接種叢枝菌根真菌孢子；