[發(fā)明專利]分室培養(yǎng)連續(xù)擴(kuò)繁叢枝菌根真菌孢子的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010017883.2
• 申請(qǐng)日: 2020-01-08
• 公開（公告）號(hào): CN111165266B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐明;王志豪;胡文濤;陳輝;梁京威;劉紫怡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01G18/00
• 分類號(hào): A01G18/00;A01G18/60;C12N3/00;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 西安智萃知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 61221
• 代理人: 李炳輝

1.分室培養(yǎng)連續(xù)擴(kuò)繁叢枝菌根真菌孢子的方法，其特征在于：

a.制備培養(yǎng)室：用隔離板(2)將培養(yǎng)盆體(1)等分為若干個(gè)隔離室，隔離板(2)高度與培養(yǎng)盆體(1)深度一致，在每個(gè)隔離板(2)上部分別開有矩形槽，在培養(yǎng)盆體(1)底端開有若干個(gè)排水孔(3)，在隔離室底部填充具有良好吸水性、保水性及透氣性的下層基質(zhì)(4)，在下層基質(zhì)(4)上填充粒徑較大，吸水性及保水性差的中層基質(zhì)(5)，在中層基質(zhì)(5)上面分別鋪設(shè)濾布(6)，在濾布(6)上面分別填充蛭石與白沙體積比為1:1的混合基質(zhì)(7)至裝滿培養(yǎng)盆體(1)，下層基質(zhì)(4)與中層基質(zhì)(5)填充厚度分別為培養(yǎng)盆體(1)深度的五分之二和十分之一，構(gòu)成培養(yǎng)室，培養(yǎng)室為圓柱形或矩形或其它形狀，培養(yǎng)室下面放置托盤(8)；

b.首先在其中任一個(gè)隔離室中播種宿主植物種子，待其長(zhǎng)成幼苗后在根系附近接種從野外分離且鑒定的或人工擴(kuò)繁的叢枝菌根真菌孢子，通過隔離室中的宿主植物進(jìn)行叢枝菌根真菌孢子的連續(xù)擴(kuò)繁，每間隔的天數(shù)為120與隔離室個(gè)數(shù)的比值，依照隔離室的排列順序在相鄰隔離室中相繼播種宿主植物種子，使其長(zhǎng)成幼苗但不接種叢枝菌根真菌孢子；

c.每間隔15天在托盤中澆注較高磷濃度的Hoagland營(yíng)養(yǎng)液，每間隔30天，在上層基質(zhì)中澆注較低磷濃度的Hoagland營(yíng)養(yǎng)液，同時(shí)往上層基質(zhì)和托盤中澆水，保持基質(zhì)含水量在50％～60％，以保證宿主植物和叢枝菌根真菌菌絲的生長(zhǎng)；

d.120天后，對(duì)首次播種的隔離室中宿主植物進(jìn)行遮光處理，使宿主植物死亡，每間隔的天數(shù)為120與隔離室個(gè)數(shù)的比值，按照原播種順序依次對(duì)其它隔離室中的宿主植物進(jìn)行遮光處理，使宿主植物死亡，任意一個(gè)隔離室中的宿主植物死亡后，移走這個(gè)隔離室中的上層基質(zhì)，收集中層基質(zhì)和下層基質(zhì)，利用濕篩傾析法獲取叢枝菌根真菌孢子；

e.取出任意一個(gè)隔離室中的基質(zhì)后，保留上層基質(zhì)重復(fù)利用，并依照上述步驟制備新的培養(yǎng)室，再次按原播種順序進(jìn)行播種接種宿主植物，經(jīng)多次循環(huán)往復(fù)操作，獲取所需用的叢枝菌根真菌孢子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分室培養(yǎng)連續(xù)擴(kuò)繁叢枝菌根真菌孢子的方法，其特征在于：

a.制備培養(yǎng)室：選用圓形培養(yǎng)盆體(1)，用兩塊十字交叉的隔離板(2)將培養(yǎng)盆體(1)等分為四個(gè)隔離室，隔離板(2)高度與培養(yǎng)盆體(1)深度一致，在每個(gè)隔離板(2)上部分別開有矩形槽，用玻璃膠將隔離板(2)與培養(yǎng)盆體(1)之間的縫隙密封，在培養(yǎng)盆體(1)底端開有四個(gè)排水孔(3)，在隔離室底部填充的下層基質(zhì)(4)為直徑2mm的白沙，在白沙上填充的中層基質(zhì)(5)為直徑4mm的玻璃珠，在玻璃珠上鋪設(shè)45μm的濾布”(6)，濾布(6)緊貼隔離板(2)上的矩形槽，在濾布(6)上面分別填充蛭石與白沙體積比為1:1的混合基質(zhì)(7)至裝滿培養(yǎng)盆體(1)，白沙與玻璃珠填充厚度分別為培養(yǎng)盆體(1)深度的五分之二和十分之一，形成培養(yǎng)室，培養(yǎng)室下面放置托盤(8)；

b.首先在其中任一個(gè)隔離室中播種宿主植物種子，待其長(zhǎng)成幼苗后在根系附近接種從野外分離且鑒定的叢枝菌根真菌孢子，通過隔離室中的宿主植物進(jìn)行叢枝菌根真菌孢子的連續(xù)擴(kuò)繁，每間隔30天，按順時(shí)針方向在相鄰的隔離室中相繼播種宿主植物種子，使其長(zhǎng)成幼苗但不接種叢枝菌根真菌孢子；

c.每間隔15天在托盤中澆注磷濃度為200μM·L^-1的Hoagland營(yíng)養(yǎng)液，每間隔30天在混合基質(zhì)中澆注磷濃度為1μM·L^-1的Hoagland營(yíng)養(yǎng)液，同時(shí)往混合基質(zhì)和托盤中澆水，保持基質(zhì)含水量在50％～60％；

d.120天后，對(duì)首次播種的隔離室中宿主植物進(jìn)行遮光處理，使宿主植物死亡，每間隔30天，按照隔離室中播種順序依次對(duì)其他三個(gè)隔離室中的宿主植物進(jìn)行遮光處理，使宿主植物死亡，任意一個(gè)隔離室中的宿主植物死亡后，移走這個(gè)隔離室中的混合基質(zhì)，收集玻璃珠和白沙，利用濕篩傾析法獲得叢枝菌根真菌孢子；

e.取出任意一個(gè)隔離室中的基質(zhì)后，保留混合基質(zhì)重復(fù)利用，并依照上述步驟制備新的培養(yǎng)室，再次按原播種順序進(jìn)行播種接種宿主植物，經(jīng)多次循環(huán)往復(fù)操作，獲取所需用的叢枝菌根真菌孢子。